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Western Blotting鉴定文献资料
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通过纯化白细胞介素－18为抗肿瘤提供基因重组药物打下实验基础及相关研究
目的：：白细胞介素－18(IL－18)在抗肿瘤等方面有重要临床作用.利用检验方法探讨 IL－18高效纯化的条件,为制备白细胞介素－18奠定重要实验室基础.IL－18体内含量极低,直接提取和纯化存在困难,利用基因工程表达和制备 IL－18具有非常重要的临床价值.方法：首先提取 pGEX－IL－18重组体质粒,并进行基因片段测序与基因库比对；将提取得到的重组体质粒转化到大肠杆菌中,制成 IL－18原核表达系统；对转染后的大肠杆菌进行增菌,并进行超声波碎菌释放出 GST－IL－18融合蛋白；后通过亲和层析方法进行分离、纯化；WB方法鉴定 IL－18,证实 IL－18表达制备成功.结果：含有 pGEX－IL－18重组体质粒的 E．coli JM109增菌培养后提取质粒,经酶切电泳,测序并利用基因库比对证实,所制备是 IL－18.然后将其转染到大肠杆菌当中,进行筛选并转染；后亲和层析纯化再经 WB方法鉴定,证实提纯 IL－18成功.结论：经过系统的实验室研究,建立了 IL－18的基因工程表达系统,并提纯成功,随着 IL－18的克隆基因的成功表达,开发生物制剂具发展前景.使其为抗肿瘤等疾病的治疗提供安全的、高效的生物免疫制剂.
