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细胞水平测定文献资料
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高效液相色谱法测定细胞内外博莱霉素-A2的含量
目的:建立细胞内外博莱霉素-A2的HPLC含量测定方法,用于博莱霉素水解酶对博莱霉素代谢在细胞培养中的研究.方法:细胞培养液经过蛋白沉淀和细胞超声破壁预处理后,采用ZORBAX Eclipse plus C18(4.6 mm×250 mm,5μm)柱,流动相为甲醇-乙腈-pH 4.2的0.05 mmol·L-1醋酸铵(7∶7∶86),流速1 mL·min-,检测波长254 nm.结果:研究结果表明培养液中博莱霉素-A2进样量在0.1～1.2μg范围内线性关系良好(r=0.9994,n=5),高、中、低3个浓度的平均回收率分别为102.2％ (RSD =2.8％)、101.3％ (RSD=1.5％)、99.8％(RSD=2.2％);细胞内液中博莱霉素-A2进样量在0.02 ～0.8 μg范围内线性关系良好(r=0.9998,n=5),高、中、低3个浓度的平均回收率分别为100.2％ (RSD=1.2％)、99.6％ (RSD=1.3％)、101.3％ (RSD=1.1％).样品溶液在24 h内稳定性良好,博莱霉素-A2在培养液中的峰面积的RSD =2.8％,在细胞内液中的峰面积的RSD=1.5％.结论:该方法测定结果准确可靠,适用于博莱霉素-A2在细胞培养中细胞内外的含量测定.
