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MSP58基因表达水平与人脑胶质瘤恶性度的关系
目的:观察MSP58基因表达水平与人脑胶质瘤恶性度的关系.方法:在41例按WHO分类和分级标准为Ⅰ-Ⅳ级的人脑胶质瘤标本、4株人脑胶质瘤细胞系(U251,U87,BT325和SHG44)以及6例正常脑组织标本中,运用半定量RT - PCR及蛋白质印迹法检测MSP58 mRNA和蛋白的表达水平.结果:MSP58 mR-NA和蛋白在人脑胶质瘤组织中存在表达,其表达水平随人脑胶质瘤恶性度的增加而升高.在正常脑组织和恶性脑胶质瘤之间,以及脑胶质瘤Ⅰ-Ⅳ级病理级别间比较均有显著差异.MSP58 mRNA和蛋白在U251、U87、BT325和SHG44细胞中均有高表达.结论:MSP58 mRNA和蛋白在人脑胶质瘤中高表达,其表达水平与脑胶质瘤的恶性度有关,提示MSP58在脑胶质瘤的形成和恶性演进中具有重要作用.
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MSP58基因RNA干涉后对人脑胶质瘤细胞裸鼠移植瘤的影响
目的 观察RNA干涉法(RNA interference,RNAi)抑制人脑胶质瘤U251细胞的MSP58基因表达后,对其在裸鼠体内成瘤性及增殖、侵袭性的影响.方法 将特异性的MSP58干涉表达载体pSilencer3.1-MSP58转染人脑胶质瘤细胞系U251(U251-S),同时构建相应的阴性对照组U251-NC,以及空载体组U251-H1 neo.运用逆转录酶-多聚酶链反应(RT-PCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞的MSP58mRNA和蛋白表达水平.用各组U251细胞建立人脑胶质瘤裸鼠皮下移植瘤模型.结果 成功建立了具有稳定下调MSP58基因表达的U251-S细胞.U251-S细胞MSP58的表达无论在mRNA水平还是在蛋白质水平均较U251组、U251-H1 neo组及U251-NC组细胞显著降低(P＜0.01).与接种U251、U251-H1neo和U251-NC细胞的裸鼠相比,接种U251-S细胞的裸鼠肿瘤形成时间延迟,肿瘤生长缓慢,肿瘤体积及瘤重均明显减小(P＜0.01).结论 MSP58基因RNAi后抑制了移植瘤细胞MSP58mRNA及蛋白的表达,进而明显抑制移植瘤的增殖和侵袭能力.
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RNA干涉脑胶质瘤MSP58基因后肿瘤转移相关基因的表达变化
目的 采用基因芯片技术,观察RNA干涉法抑制人脑胶质瘤细胞系U251细胞MSP58基因表达后肿瘤转移相关基因的变化,从而了解MSP58在肿瘤转移相关基因通路中的可能定位.方法 将特异性的MSP58干涉表达载体pSilencer3.1-MSP58转染人脑胶质瘤细胞系U251,同时构建相应的阴性对照载体pSilencer3.1-NC以及空载体pSilencer3.1-H1neo.运用半定量RT-PCR及Western blot的方法检测稳定转染和未转染干涉载体的胶质瘤细胞MSP58的mRNA和蛋白的表达水平.运用基因芯片技术分析pSilencer3.1-MSP58转染后肿瘤转移相关基因表达的变化.结果 成功建立了具有稳定下调MSP58基因表达的U251-S细胞、阴性对照U251-NC细胞以及含有空载体的U251-H1 neo细胞.干涉组细胞的MSP58的表达无论在mRNA水平还是在蛋白水平均较阴性对照组及空载体组细胞显著降低.基因芯片技术共筛选肿瘤转移相关基因128个,其中上调2倍以上的共有34个基因.结论 干涉MSP58基因表达后,胶质瘤细胞增殖﹑迁移和侵袭能力的下降与肿瘤转移相关基因表达的变化有关.
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稳定整合靶向性MSP58基因RNA干涉载体的胶质瘤细胞系建立
目的 探讨经载体介导的RNA干涉法建立抑制癌基因微小球蛋白(58-kDa microspherule protein,MSP58)表达的稳转细胞系的可行性.方法 根据MSP58 cDNA编码序列,设计并合成针对MSP58基因的特异性RNA干涉片断,并将其克隆入pSilencer3.1-H1neo干涉载体中,构建MSP58基因shRNA真核表达载体pSilencer-MSP58.重组载体pSilencer-MSP58和pSilencer3.1-H1neo阴性对照载体pSilencer3.1-H1neo Negtive经脂质体LipofectamineTM2000介导法转染胶质瘤细胞株U251;转染细胞经过G418筛选,采用逆转录酶-多聚酶链反应(Reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-PCR)、Western blot方法分别在mRNA水平和蛋白水平检测、筛选G418抗性的克隆细胞.结果 成功构建了MSP58基因shRNA真核表达载体pSilencer-MSP58,经酶切、测序鉴定证实克隆正确.获得了稳定转染pSilencer-MSP58载体的6个胶质瘤细胞株.结论 特异性shRNA能够明显抑制MSP58基因在U251细胞中的表达,并建立了稳定整合有靶向MSP58基因RNA干涉载体的胶质瘤细胞系,这为进一步研究MSP58在胶质瘤细胞系U251中的生物学功能和作用机制奠定了实验基础.
