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双荧光蛋白文献资料
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4ARE强化的双荧光蛋白报告基因载体的构建及鉴定
目的:构建4ARE强化的红、绿双荧光蛋白报告基因载体.方法:人工合成3对ARE序列,经退火和磷酸化后插入pARE-TK-GFP载体,构建成p4ARE-TK-GFP载体.以质粒pDsRed2-N1为模板,PCR扩增红色荧光蛋白及其启动子序列与pMD18-T载体连接,构建成pMD-DsRed载体.用Ade I酶和BspT I酶对载体pMD-DsRed和p4ARE-TK-GFP进行双酶切,连接产物转化大肠埃希菌DH5α 感受态细胞后,挑取阳性克隆子进行质粒抽提酶切及测序鉴定.结果:经酶切及DNA测序证实,目的片段ARE及DsRed的序列完全正确,重组双荧光蛋白报告基因载体成功转入DH5α.结论:成功构建4ARE强化的双荧光蛋白报告基因载体并在DH5α内表达,为进一步研究ARE的调控作用奠定了基础.
关键词： 抗氧化反应元件(ARE) 双荧光蛋白 报告基因 载体构建
