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CML66文献资料
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CML66基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备
目的: 获得原核表达的新的肿瘤抗原CML66蛋白, 并制备兔多克隆抗体.方法: 采用RT-PCR技术从睾丸中获得CML66的cDNA, 亚克隆至pGEMT载体中, 经测序确证后, 将该基因插入原核表达载体pET32b(+)中, 通过电穿孔技术转化E.coli表达菌BL21(DE3), 以IPTG诱导6×His融合蛋白的表达, 并经Ni2+亲和柱层析纯化.通过SDS-PAGE、Western blot鉴定后, 应用纯化蛋白免疫家兔, 制备多克隆抗体.结果: 获得的CML cDNA序列与GenBank登录的cDNA序列一致.用纯化的目的蛋白免疫家兔后, 获得高滴度的特异性兔抗血清.结论: 成功地克隆CML66基因, 建立了原核表达、纯化体系.制备纯化的CML66蛋白和高滴度、特异的兔抗血清.
