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致错PCR文献资料
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通过随机突变提高抗TNF-α单链抗体的亲和力
目的:提高抗TNFα单链抗体(scFv)的亲和力.方法: 应用错配PCR技术在抗TNF-α scFv基因中引入随机突变, 再通过DNA交换( shuffling)使引入的点突变进一步重排组合, 构建突变噬菌体抗体库.采用硫氰酸盐洗脱法对抗体库进行淘筛.挑选活性得到改良的克隆, 用斑点ELISA法及硫氰酸盐洗脱ELISA法评估其亲和力的改善.结果: 对PCR错配的突变库筛选未得到亲和力明显改善的抗体变种, 经DNA交换进一步构建变种库后, 筛选获得1个亲和力提高的克隆, 其相对亲和指数为1.37 mol/L, 较亲本抗体的相对亲和指数0.48 mol/L有明显提高.结论: 通过错配PCR和DNA交换引入随机突变构建抗体库, 可有效地提高scFv的亲和力.
