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植原体文献资料
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植原体免疫主导膜蛋白A的原核表达载体构建、表达及其抗血清制备
目的 构建植原体免疫主导膜蛋白A (IdpA)的原核表达载体,表达并纯化目的蛋白,制备抗血清.方法 以重组克隆质粒pMD18-T-IdpA为模板PCR扩增IdpA基因片段,经酶切连接将IdpA基因克隆到原核表达载体pET-28a(+),重组质粒转化感受态E.coli BL21(DE3),PCR和双酶切进行鉴定.IPTG诱导重组菌表达IdpA蛋白,并进行纯化和鉴定,以纯化获得的IdpA蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠制备抗血清,并采用ELISA和Western blot法检测抗血清的效价和特异性.结果 成功构建了原核表达载体pET-28a(+)-IdpA,并在大肠杆菌中能稳定表达IdpA蛋白,经纯化获得了纯度大于90％的高纯度目的蛋白,用纯化的IdpA蛋白免疫BALB/c小鼠,获得了效价高于1:320 000的强特异性抗IdpA蛋白抗血清.结论 成功进行了IdpA的原核表达并制备了抗血清.
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病原微生物的生物大分子指纹图谱分类及分型鉴定技术
对当今流行的生物大分子指纹分类及分型鉴定技术进行了综合分析.探讨了这些技术的适用范围、稳定性、易用性和分析效率等.提出了适合于检验检疫的分类及分型鉴定技术及其在检验检疫中的应用价值.对进一步拓展PCR-RFLP和AFLP技术的适用范围进行了研究.结果表明:PCR-RFLP技术可以不经过分离培养,直接应用于难以人工培养和分离提纯的病原微生物,如植原体的分类鉴定.经过恰当设计,AFLP技术也同样适用于对植原体的分类鉴定.
