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载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3A(APOBEC3A)文献资料
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人天然免疫蛋白载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3A(APOBEC3A)的克隆表达及活性鉴定
目的 构建载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3A(APOBEC3A)表达载体,真核细胞表达APOBEC3A并鉴定其胞嘧啶脱氨酶活性.方法 构建APOBEC3A真核表达载体pcDNA3.0-APOBEC3A,转染HEK293T细胞和HepG2细胞.Western blot法鉴定APOBEC3A蛋白表达,免疫荧光细胞化学染色确定APOBEC3A在HEK293T细胞和HepG2细胞的定位,利用组蛋白(His)标签蛋白纯化方法富集纯化APOBEC3A蛋白,荧光偏振技术检测APOBEC3A脱氨酶活性.结果 DNA测序证实pcDNA3.0-APOBEC3A插入长600 bp的APOBEC3A基因序列;该质粒能在HEK293T细胞和HepG2细胞表达APOBEC3A,APOBEC3A在HEK293T细胞中主要分布于胞质,在HepG2细胞中胞质和胞核均匀分布;纯化获得的APOBEC3A对单链DNA中TTCA序列具有胞嘧啶脱氨基活性.结论 成功构建APOBEC3A真核表达载体,APOBEC3A在HEK293T细胞和HepG2细胞定位不同,表达的APOBEC3A具有胞嘧啶脱氨基活性.
