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中电导钙激活钾电流文献资料
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RNA干扰HeLa细胞IKCa1基因对中电导钙激活钾通道电流的影响
目的:本研究旨在探讨RNA干扰HeLa细胞IKCa1基因对中电导钙激活钾通道电流(IKCa1)的影响.方法:采用携带IKCa1基因的pGenesil-IKCa1质粒及pGenesil-HK对照质粒分别转染HeLa细胞.实验分为Control组(无质粒转染组),pGenesil-HK组和pGenesil-IKCa1组.在荧光显微镜下观察报告基因GFP在HeLa细胞中的表达情况并将GFP阳性率作为转染效率的评价指标,采用RT-PCR技术检测IKCa1基因的表达水平,应用膜片钳电生理技术记录IKCa1.结果:①pGenesi1-HK组和pGenesil-IKCa1组转染率分别为75.3％和72.4％,两组之间阳性率差异无统计学意义(P＞ 0.05);②pGenesil-IKca1组IKCa1基因的mRNA表达水平明显低于Control组及pGenesil-HK组(P＜0.01);③在HeLa细胞能记录到IKCal电流,该电流具有钙离子依赖性且能被Clotrimazole完全阻断,与Control组及pGenesil-HK组相比,pGenesil-IKCa1组的IKCa1电流电压曲线下移,钳制电压为+60 mV时电流密度为(10.05±3.37)pA/pF,明显低于Control组(21.78±5.54)pA/pF和pGenesil-HK组(20.54±5.29)pA/pF(P＜ 0.01).结论:通过RNA干扰能有效抑制宫颈癌HeLa细胞IKCa1电流,为今后开展以IKCa1为靶点的宫颈癌的基因治疗提供新的靶点和电生理实验依据.
