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东方拟无枝酸菌HCCB10007内attB位点的人工构建
目的 在万古霉素产生菌东方拟无枝酸菌HCCB 10007内构建attB整合位点,将噬菌体ΦC31重组酶介导的位点特异性整合系统引入该菌,从而提高该工业菌株的遗传操作效率.方法 在不破坏结构基因的情况下经同源重组将来源于变铅青链霉菌的attB编码序列插入到东方拟无枝酸菌HCCB 10007基因组中,然后将带有绿色荧光蛋白基因(eGFP)的特异性位点重组质粒pLYGYQ2导入该工程菌中.用于验证整合系统的有效性.结果 获得基因组中整合有attB位点的基因工程菌LYGYQA.eGFP 基因顺利整合入所构建的attB位点,并且获得了表达.同时发现该系统的整合效率较同源重组效率提高了约3倍.结论 本研究不但表明来源于链霉菌的位点特异性整合系统可以成功应用于东方拟无枝酸菌中,也证明绿色荧光蛋白基因可以作为报告基因用于该菌的研究.
