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转移抑制基因nm23-H1参与肺癌Ras信号传导机理研究
背景与目的 nm23-H1基因已被证实为一种肿瘤转移抑制基因,但其作用机理尚不明了,本研究探讨nm23-H1参与肺癌Ras信号传导的机理.方法 应用脂质体法将pEGFP-nm23-H1野生型和突变型质粒(WT,H118F.S120G,P96S,S44A)转染人大细胞肺癌细胞株L9981,采用免疫共沉淀与Western blot方法检测野生型和突变型nm23-H1蛋白与Ras支架蛋白KSR的关系.结果 在转染了野生型和突变型质粒的五个细胞株中,鼠抗nm23-H1免疫沉淀物在86KDa处可检测到KSR的阳性条带,而各组KSR的量应用单因素方差分析比较无显著性差异(F=0.190,P=0.938).结论 本研究结果表明nm23-H1与KSR存在相互作用,但这种相互作用与nm23-H1有无突变及突变位点无关,nm23-H1可能是通过KSR参与肺癌Ras信号传导的.
关键词： nm23-H1 KSR 肺肿瘤Ras信号传导 -
小鼠Ras激酶抑制剂(KSR)基因氨基端和羧基端真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达
背景与目的已有的实验证据表明,Ras激酶抑制剂(kinase suppressor of Ras,KSR)的功能主要是作为一个支架蛋白组装MAPK及其上游调控子形成多蛋白的复合体.但KSR是否存在激酶活性,一直是争论的焦点.本研究的目的是构建小鼠KSR基因氨基端(N-KSR)和羧基端(C-KSR)的真核表达载体,并观察其在293T细胞中的表达.方法通过PCR方法扩增N-KSR和C-KSR目的片段,利用基因重组技术构建pCMV-Tag2b-N-KSR和pCMV-Tag2b-C-KSR真核表达载体,并进行酶切和测序鉴定.鉴定正确的克隆瞬时转染293T细胞,通过Western blot方法检测目的蛋白的表达.结果通过酶切和测序鉴定,pCMV-Tag2b-N-KSR和pCMV-Tag2b-C-KSR真核表达载体序列正确,编码框正确.转染后的293T细胞经Western blot检测,能够表达目的蛋白.结论成功构建了pCMV-Tag2b-N-KSR和pCMV-Tag2b-C-KSR真核表达载体并可在293T细胞中表达,为以后的研究奠定了基础.
