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人基质细胞衍生因子lα和hVEGF165基因转染成肌细胞的实验研究
目的 探索转染hVEGF165基因、人基质细胞衍生因子1α(human stromal cell-derived factor 1α,hSDF-1α)基因的大鼠成肌细胞在体外mRNA和蛋白表达,为进一步检测这两种基因对血管生成的协同效应奠定基础.方法 取新生1日龄雄性SD大鼠,采用胰蛋白酶消化法体外分离培养、纯化成肌细胞,并采用结蛋白免疫细胞化学染色鉴定.将质粒增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)-hVEGF165和EGFP-hSDF-1α转染第3代成肌细胞(转染组),以未转染质粒的细胞作为对照组.体外培养后各时间点行RT-PCR、Western blot、ELISA法检测两种质粒mRNA及蛋白的表达.结果 培养的细胞经鉴定确定为成肌细胞.荧光显微镜观察示成功转染hSDF-1α和hVEGF165进入成肌细胞,可见绿色荧光表达.RT-PCR检测示转染组转染后2、4、6、8d均可见hVEGF165和hSDF-1αmRNA的表达,Western blot检测示转染组转染后2、4、6、8d成肌细胞内均有hVEGF165和hSDF-1α蛋白表达,对照组均无相关表达.ELISA检测示对照组hSDF-1α和hVEGF165均稳定表达,呈较低水平.转染组转染2d时hSDF-1α和hVEGF165表达均达较高水平,之后呈逐渐下降趋势;转染后各时间点间hSDF- 1α和hVEGF165表达比较差异均有统计学意义(P＜0.05).转染组转染后各时间点与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论转染hSDF-1α和hVEGF165进入大鼠成肌细胞后在体外均有表达,为下一步研究体内是否表达提供了实验依据.
