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V5相融合蛋白文献资料
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V5抗原表位融合性人雄激素受体基因酵母载体的构建及表达
建立重组基因酵母筛选雄性内分泌干扰物的关键是雄激素受体(AR)在酵母细胞中的表达.为此,本文用PCR方法从W303-1A酵母基因组扩增3-磷酸甘油醛脱氢酶(GPD)启动子,将其插入到pYestrp2载体的SwaⅠ和BamH Ⅰ酶切位点,将所构建成的载体命名为pGPD.将5 '和3 '端含有BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ黏性末端Ⅴ5抗原表位DNA,插入到pGPD相应的酶切位点,构建成pGPDV5载体.用PCR方法从pcDNA3.1/AR扩增2723 bp全长的AR开放性阅读框(ORF),将其插入到pGPDV5载体,构建成与V5抗原表位相融合的酵母表达载体pGPDV5/AR,将其转入W303-1A酵母细胞.用Western blot检测该酵母细胞提取液中的AR与V5相融合的表达蛋白,一抗选用小鼠源性V5单克隆抗体(IgG2a),二抗选用偶联有辣根过氧化物酶(HRP)的羊抗小鼠的多克隆抗体(IgG).结果表明,与V5相融合的AR蛋白在酵母细胞中成功表达.
