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淋球菌LOS 2C7表位筛选及其与HBc融合蛋白的原核表达
目的 将淋球菌脂寡糖的2C7表位插入乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的MIR区,通过原核表达系统进行融合蛋白的表达,以期获得高免疫原性的淋球菌亚单位疫苗的候选靶位.方法 通过间接ELISA法,以CMCC29403菌株的LOS为包被抗原,对7个表位进行筛选;并通过杀菌试验检测肽段免疫动物产生血清的保护力.对已筛选好的肽段基因进行人工合成,通过重叠PCR将肽段基因嵌入HBc基因中,以增强表位的免疫原性,并进行原核表达.结果 初步研究表明了表位PEP1,PEP2,PEP7具有较强的脂寡糖(LOS)的免疫原性,能够模拟脂寡糖的抗原性.这3个肽段可能成为候选疫苗亚单位.通过重叠PCR方法成功地将PEP1,PEP2,PEP7三个表位基因序列插入乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的刺突(MIR)部位,构建了HBc-PEP1,HBc-PEP2,HBc-PEP7融合基因,通过PET22b(+)载体进行原核表达,为下一步疫苗的研究奠定了基础.结论 2C7表位PEP1,PEP2,PEP7具有较强的脂寡糖(LOS)的免疫原性,能够模拟脂寡糖的抗原性.表位与HBc的融合蛋白可以通过原核表达系统进行可溶性表达,为下一步疫苗的研究奠定基础.
关键词： 2C7 表位 淋球菌 脂寡糖(LOS) 乙型肝炎病毒核心抗原(HBc) 原核表达 -
TGFβ1-(78-109)-HBc融合蛋白的原核表达
目的应用基因工程技术制备TGFβ1-(78-109)-HBc融合蛋白,作为TGFβ1疫苗,用于抗纤维化研究.方法合成TGFβ1-(78-109)编码区DNA,连接于质粒载体,再在其下游连接HBc编码区,测序证实后,进行原核表达,表达产物以SDS-PAGE、ELISA等方法鉴定.结果经DNA序列分析证实融合基因序列完全正确,SDS-PAGE证实原核表达产物相对分子质量为25 kD,ELISA检测证实TGFβ1-(78-109)和HBc的抗原表位均可正确暴露.结论本研究成功构建了TGFβ1-(78-109)-HBc融合基因,进行了原核表达,并初步证实了表达产物的抗原性,为下一步进行TGFβ1疫苗抗纤维化的研究打下了基础.
