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快速蛋白液相色谱仪文献资料
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可激活人γδT细胞的结核杆菌耐热多肽抗原的初步纯化与活性鉴定
目的对结核杆菌耐热多肽抗原(Mtb-Ag)的蛋白组成进行定性分析,并观察Mtb-Ag及其纯化组分刺激人外周血γδT细胞和αβr细胞增殖反应的量效关系.方法用快速蛋白液相色谱仪(FPLC)定性分析Mtb-Ag的蛋白组成,并用不同剂量的Mtb-Ag及其纯化组分体外刺激健康人外周血PBMC,培养9 d后经流式细胞仪检测细胞表型.结果Mtb-Ag经FPLC MonoQ离子交换柱分析存在20种蛋白成分.Mtb-Ag在合适刺激剂量时对人γδT细胞发挥优势扩增;当剂量过大则对αβT细胞发挥优势扩增;其分离纯化的含大分子蛋白的蛋白峰Ⅰ随着刺激剂量增加而对αβT细胞的扩增表现显著增强趋势;而其分离的含低分子多肽的蛋白峰Ⅱ随着刺激剂量增加则对γδT细胞扩增表现显著增强趋势,并且其活性明显高于蛋白峰Ⅰ,同时其对αδT细胞的扩增效应并不明显,并显著低于Mtb-Ag和蛋白峰Ⅰ.结论Mtb-Ag刺激γδT细胞扩增时应选择合适的刺激剂量,其所含的低分子多肽抗原能特异性激活γδT细胞,而其所含的大分子蛋白抗原则特异性激活αδT细胞.
