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当归补血汤经TGF-β1/Smad2通路对Ang Ⅱ诱导肥大心肌细胞的保护机制研究
目的:研究当归补血汤对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ) 诱导H9C2肥大心肌细胞的保护作用及机制, 探讨其与转化生长因子β1 (TGF-β1) 及下游分信号Smad2信号通路的关系.方法:体外培养细胞, 用α-actin抗体免疫组化法鉴定心肌细胞;采用10-7mol/L AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大, 通过检测心肌细胞蛋白含量及心钠素 (ANF) mRNA表达以验证心肌细胞肥大模型;在模型建立成功的基础上利用逆转录聚合酶链反应RT-PCR法测定不同浓度 (5％、10％、15％、20％) 当归补血汤含药血清对肥大心肌细胞ANF mRNA表达的影响, 选取佳干预浓度;将心肌细胞分组为空白对照组、10-6mol/L AngⅡ模型组、10-7mol/L AngⅡ模型组和10％含药血清组, 镜下观察各组细胞形态, 并利用蛋白免疫印迹法 (Western blot) 检测各组TGFβ1/Smad2信号通路相关蛋白TGFβ1、Smad2表达与活化情况.结果:鉴定细胞符合心肌细胞特征;与空白对照组相比, 10-7mol/L AngⅡ模型组心肌细胞蛋白含量与ANFmRNA表达均显著增加, 说明10-7mol/L AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大模型建立;10％、15％当归补血汤含药血清浓度组较模型组ANF mRNA表达显著减少, 10％当归补血汤含药血清组ANF表达降低更为明显;形态学观察, AngⅡ模型组心肌细胞密度和形态增大, 漂浮细胞增多;10-6mol/L、10-7mol/L AngⅡ模型组较空白对照组TGF-β1、Smad2蛋白表达均显著增多, 10％当归补血汤含药血清组较10-6mol/L、10-7mol/L模型组TGF-β1、Smad2蛋白表达均显著减少.结论:当归补血汤含药血清具有抗心肌细胞肥大的作用, 其保护机制可能与调控心肌细胞TGF-β1/Smad2信号通路有关.
关键词： 当归补血汤 血管紧张素Ⅱ 心肌细胞 TGF-β1/Smad2信号通路
