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胞外段蛋白文献资料
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重组人TLR4胞外段对诱导分化成熟的U937细胞TNF-α分泌的影响
目的 观察重组人TLR4胞外段对诱导分化成熟的U937细胞TNF-α分泌的影响.方法 通过G418筛选稳定表达TLR4胞外段的HEK293细胞,用培养液上清作用于诱导分化成熟的U937细胞,通过ELISA观察该细胞TNF-α的分泌变化.结果 稳定表达TLR4胞外段的HEK293细胞培养液上清能减少诱导分化成熟的U937细胞TNF-α的分泌量(P＜0.01),并随剂量增加而降低.结论 表达的重组人TLR4胞外段能与诱导分化成熟的U937细胞表面的TLR4胞外段竞争性结合LPS,干扰LPS所引起的炎症信号转导,引起TNF-α分泌量降低.
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人Toll-like receptor 2胞外段的克隆和表达
目的克隆、表达人Toll-like receptor 2(TLR2)胞外段(A26-T588)基因,获得人TLR2胞外段蛋白.方法RT-PCR扩增TLR2胞外段基因,以pcDNA3.1+质粒为载体在HEK293细胞中表达TLR2胞外段蛋白,同时以pcDNA3.1+/TLR2(A26-T588)重组质粒免疫昆明鼠,制备抗TLR2胞外段蛋白多抗.结果PCR扩增及重组质粒测序结果表明成功地构建了pcDNA3.1+/TLR2(A26-T588)真核表达质粒,SDS-PAGE分析纯化产物在Mr为68 000处出现明显蛋白条带.重组质粒DNA免疫小鼠3次后,血清抗体滴度可达1:250.TLR2胞外段蛋白可与LPS结合,并在一定的质量浓度范围内呈剂量依赖性.结论构建的pcDNA3.1+/TLR2(A26-T588)真核表达质粒可在哺乳动物细胞中表达TLR2胞外段蛋白,并与重组质粒DNA免疫小鼠抗血清及TLR2单克隆抗体TL2.1特异性反应,由此证明其表达正确.
