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免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白文献资料
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SIGIRR胞内区酵母双杂交诱饵质粒的构建及自激活作用检测
目的:构建单免疫球蛋白白细胞介素-1受体相关蛋白(SIGIRR)胞内区酵母双杂交诱饵质粒,并检测其是否存在自激活作用。方法聚合酶链反应(PCR)扩增人SIGIRR胞内区基因片段(480~1230 bp),并将此基因片段重组入pSos载体中,构建诱饵质粒pSos-SIGIRR ,经酶切及测序鉴定构建正确后,将重组质粒与对照质粒共转化感受态酵母菌cdc25H ,接种于25℃SD/Glucose(-UL)和SD/Galactose(-UL)平板以及37℃ SD/Glucose(-UL)和SD/Galactose(-UL)平板上,连续观察6 d酵母菌生长状况;用Western blot法检测目的蛋白表达情况。结果正确构建了人SIGIRR胞内区酵母双杂交诱饵质粒pSos-SIGIRR , pSos-SIGIRR在酵母双杂交系统中无自激活及毒性作用。Western blot结果显示,目的蛋白以170×103的融合蛋白形式表达。结论诱饵质粒pSos-SIGIRR可应用于酵母双杂交系统中,为在人肺互补脱氧核糖核酸(cDNA )文库中寻找与SIGIRR相互作用蛋白奠定了重要基础。
关键词: 免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白 双杂交系统技术 诱饵质粒 自激活