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ERR1突变体I240R对其转录活化功能的影响
目的分析ERR1突变体I240R对ERR1转录活化功能的影响.方法用重叠延伸PCR构建ERR1的缺失突变体ERR1/I240R到真核表达质粒pSG5上,通过荧光素酶报告基因表达系统检测ERR1/I240R对ERR1转录活化功能的影响.结果测序证实成功构建了ERR1的突变体pSG5/ERR1/I240R.报告基因表达系统检测显示ERR1/I240R 激活的荧光素酶报告基因活性明显高于野生型的ERR1.结论 ERR1突变体ERR1/I240R转录活化功能明显高于野生型的ERR1,为进一步研究ERR1的结构与功能打下了基础.
关键词： 雌激素受体相关受体1 突变体 转录活化 -
ERR1与核受体辅活化子相互作用位点研究
目的分析ERR1与核受体辅活化子相互作用的位点.方法用常规PCR方法和重叠延伸PCR构建ERR1的各种突变体到表达质粒pGBT9上,通过酵母双杂交实验分析其与已知核受体辅活化子PNRC的相互作用.结果成功构建了ERR1的缺失突变体pGBT9/ERR1 1-412、pGBT9/ERR1 1-144、pGBT9/ERR1 190-412 、pGBT9/ERR1 145-423、 pGBT9/ERR1 190-423、 pGBT9/ERR1 190-423 F232A、 pGBT9/ERR1 190-423 K244A.酵母双杂交实验显示ERR1的氨基酸145-423和190-423 可分别与PNRC相互作用;ERR1 190-423 K244A与PNRC的相互作用明显低于ERR1 190-423;其它突变体与PNRC的相互作用未检测到.结论 ERR1与核受体辅活化子相互作用的位点位于ERR1的配体结合结构域(LBD,aa190-423),ERR1与核受体辅活化子相互作用依赖于其LBD的AF2结构域,AF2结构域外的其它氨基酸F232、K244也对ERR1与核受体辅活化子相互作用起关键作用.
关键词： 雌激素受体相关受体1 核受体辅活化子 相互作用 -
ERR1突变体K244A对其转录活化功能的影响
目的 分析ERR1突变体K244A对ERR1转录活化功能的影响.方法 用重叠延伸PCR构建ERR1的缺失突变体ERR1/K244A到表达质粒pSG5上,通过荧光素酶报告基因表达系统检测ERR1/K244A对ERR1转录活化功能的影响.结果 测序证实成功构建了ERR1的突变体pSG5/ERR1/K244A.报告基因表达系统检测显示ERR1/K244A 激活的荧光素酶报告基因活性明显低于野生型的ERR1.结论 ERR1突变体ERR1/K244A转录活化功能明显低于野生型的ERR1,为进一步研究ERR1的结构与功能打下了基础.
关键词： 雌激素受体相关受体1 突变体 转录活化
