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Cullin5文献资料
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树突状细胞中Rab40b/c相互作用蛋白质的鉴定研究
目的 改进串联亲和纯化质谱(TAP-MS)技术,鉴定并验证Rab40b和Rab40c在树突状细胞中的相互作用蛋白质.方法 用分子克隆技术构建融合蛋白基因eXact-6×His-EYFP-Rab40b和eXact-6×His-EYFP-Rab40c的表达载体,采用慢病毒感染建立融合蛋白eXact-6×His-EYFP-Rab40b和eXact-6×His-EYFP-Rab40c稳定表达的树突状细胞系.改进串联亲和纯化技术,通过eXact-6×His标签进行新型串联亲和纯化和qTOF液质检测,运用CompPASS算法过滤和GO富集分析,鉴定Rab40b和Rab40c的相互作用蛋白,并采用免疫共沉淀验证.结果 成功构建eXact-6×His-EYFP-Rab40b和eXact-6×His-EYFP-Rab40c融合蛋白稳定表达的树突状细胞系.采用新型串联亲和纯化方法,鉴定获得26个Rab40b高可信相互作用蛋白和16个Rab40c高可信相互作用蛋白.Rab40b、Rab40c分别与ElonginB、ElonginC、Cullin5具有相互作用.结论 成功建立新型串联亲和纯化方法.ElonginB、ElonginC、Cullin5是Rab40b、Rab40c的相互作用蛋白.
