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4-硝基-1-萘磷酸酯文献资料
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用4-硝基-1-萘磷酸酯为底物测定碱性磷酸酶活性
目的:合成4-硝基-1-萘磷酸酯(4-nitro-1-naphthyl phosphate,NNPP)为显色底物测定牛小肠黏膜碱性磷酸酶(alka-line phosphatase,ALP).方法:4-硝基-1-萘酚(4-nitronaphthol,4-NNP)与三氯氧磷反应,经硅胶柱纯化制得NNPP;检测产物吸收跟踪水解过程测定初速度,双倒数法测定米氏常数(Michaelis-Menten constant,Km).结果:ALP水解NNPP产物大差吸收峰接近460 nm,等吸收波长接近405 nm.与p-硝基苯酚相比,在pH 6.0～7.0间4-NNP消光系数为其3倍以上,在pH 7.0以上为其2倍以上.ALP对NNPP的Km约12 μmol/L而p-硝基苯基磷酸酯的Km约35 μmol/L,产物磷酸相对NNPP的竞争性抑制常数接近20 μmol/L.ALP催化NNPP水解效率接近水解p-硝基苯基磷酸酯的40％.结论:NNPP可用于测定ALP活性,且有望与作用于p-硝基苯酚类显色底物的其它酶联用实现单通道两种酶同步测定.
关键词： 碱性磷酸酶 4-硝基-1-萘磷酸酯 4-硝基苯基磷酸酯
