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干细胞标志 Lgr5在糖尿病小鼠小肠上皮中的表达
目的：探讨糖尿病小鼠小肠上皮干细胞标志分子G蛋白偶联受体5（Lgr5）的表达及干细胞数量的改变情况。方法采用链脲佐菌素腹腔注射的方法建立糖尿病小鼠模型，用免疫组织化学检查（免疫组化）检测糖尿病小鼠（6只）与正常小鼠（6只）小肠上皮组织中 Lgr5的表达，并分离糖尿病小鼠与正常小鼠原代小肠上皮细胞，采用流式细胞技术测定 Lgr5阳性细胞在上皮细胞中的比例。结果免疫组化结果显示糖尿病与正常小鼠小肠上皮每个隐窝单位的 Lgr5阳性细胞数量分别为（3．7±0．5）个及（1．5±0．6）个，两者比较差异有统计学意义（P ＜0．05）。流式细胞技术测得糖尿病与正常小鼠小肠上皮 Lgr5阳性细胞比例分别为（28．75±3．69）％及（6．55±1．78）％，前者上皮组织中 Lgr5阳性细胞比例显著高于后者（P ＜0．05）。结论链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠小肠上皮 Lgr5阳性干细胞数量增加，Lgr5在糖尿病小鼠小肠上皮细胞高表达。
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胎牛小肠上皮干细胞的分离和培养并诱导其向肝细胞样细胞分化
目的 建立胎牛小肠上皮干细胞(IESC)分离和培养的体系,并检测其表面标志物及向肝细胞样细胞分化的潜能.方法 取3～5月龄胎牛,分离小肠组织,用胶原酶消化获得IESC,在DMEM/F12培养基中培养,观察其形态学特征.传代培养、生长曲线分析其增殖能力,并探索体外分化潜能.反转录PCR检测IESC标志基因Bmi1、Hes1、Lgr5和细胞角蛋白19(CK19)的mRNA表达,免疫细胞化学染色检测CK19、Bmi1、LGR5蛋白的表达.经成纤维细胞生长因子4(FGF-4)和肝细胞生长因子(HGF)诱导后,通过糖原染色和反转录PCR法观察向肝细胞样细胞的分化情况.结果 IESC可在体外扩增培养,表达CK19、Bmi1、Hes1、Lgr5的mRNA和CK19、Bmi1、LGR5蛋白,诱导后细胞糖原染色阳性,表达甲胎蛋白(AFP)和白蛋白(ALB)的mRNA.结论 成功建立了IESC的分离培养方法,并成功诱导IESC向肝细胞样细胞分化.
