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狼毒大戟提取物通过NF-κB通路激活潜伏HIV
目的 研究狼毒大戟提取物对潜伏HIV激活的影响,探讨其激活潜伏HIV可能的机制以及清除HIV的作用.方法 取新鲜狼毒大戟植物根部组织,液氮速冻并粉碎成末,冷冻干燥3d后称取少量,采用丙酮一步法提取并浓缩.以甲醇-水为流动相,采用HPLC反相C18柱分离,并通过MS鉴定后,得到狼毒大戟提取物(EFE).以潜伏HIV细胞系J-Lat10.6为激活模型,以TNF-α(10ng/mL)作为阳性对照,EFE(50μg/mL)处理24h后,采用FACS分析GFP阳性率以观测激活活性.采用不同浓度NF-κB抑制剂(Bay11-7082)抑制EFE活性,并用WB检测2h内p65入核水平,以及24h内HIV蛋白p24随时间点变化情况.结果 丙酮一步法可简便快速从狼毒大戟植物中提取得到EFE,经鉴定含prostratin及其类似物,分离后测得其中prostratin浓度为0.53mmol/L.EFE(50μg/mL)作用24h可产生约50％激活潜伏HIV活性,同时HIV蛋白p24水平随时间显著增加.进一步研究发现NF-κB通路抑制剂(Bay11-7082)可对EFE活性产生浓度依赖抑制作用,且2h内胞核p65水平在EFE作用下增加明显.结论 狼毒大戟提取物EFE含有效成分prostratin及其类似物,可产生较强激活潜伏HIV活性,其机制为通过激活NF-κB通路促进p65入核从而发挥作用.
关键词： NF-κB prostratin 潜伏HIV 狼毒大戟
