首页 > 文献资料
-
miR-21靶向TLR-4/MyD88信号通路介导冷空气诱导的气道免疫失调
目的 探讨miR-21在冷空气诱导的气道上皮免疫功能失调中的作用及其可能的潜在分子机制.方法 气-液双相法培养人永生化气道上皮细胞BEAS-2B及16HBE,通过逆转录荧光定量PCR法检测不同时间梯度冷暴露的细胞中内源性miR-21,miR-164,miR-155的水平改变.通过构建TLR-4 3' UTR端及其结合位点突变质粒,并与miR-21模拟物、miR-21抑制物以及对照共转染BEAS-2B及16HBE细胞,进行双荧光素酶标记试验证实TLR-4为miR-21的靶蛋白.利用lipofectamine2000分别将miR-21模拟物、miR-21模拟对照物、miR-21抑制物、miR-21抑制对照物转染给BEAS-2B及16HBE细胞,并给予常温(37℃)培养或冷暴露(30℃),以Western Blot法检测各实验组TLR-4/MyD88蛋白水平.结果 低温诱导气道上皮细胞内miR-21水平提高(P＜0.05),而miR-164及miR-155无显著变化.低温提高气道上皮细胞内miR-21水平呈时间依赖性.双荧光素酶报告实验证实,TLR-4为miR-21的直接靶蛋白.Western Blotting法检测结果显示转染miR-21模拟物的BEAS-2B及16HBE细胞在常温培养下TLR-4/MyD88蛋白水平显著低于对照组(P＜0.05),低温刺激可降低气道上皮细胞内TLR-4/MyD88的蛋白水平(P＜0.05);而使用miR-21抑制物处理,可部分抑制低温诱导的TLR-4/MyD88的蛋白水平下调(P＜0.05).结论 低温刺激可能通过提高气道上皮细胞内miR-21水平,降低TLR-4/MyD88蛋白水平,影响气道上皮免疫功能.
关键词： miR-21 冷空气 气道 免疫失调 TLR-4/MyD88
