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染色质凝聚文献资料
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药物诱导细胞凋亡时DNA检测技术的探讨
目的:比较检测细胞凋亡时DNA变化的三种方法.方法:联合采用Hoechst33342和PI荧光双染显微镜观察,DNA凝胶电泳和流式细胞仪测定三种方法检测甘草提取物诱导MGC-803细胞凋亡时DNA的变化.结果:低浓度药物作用时,荧光显微镜下观察到DNA凝聚和PI排斥,但DNA电泳不出现Ladder断裂片段,4℃重悬后FCM才能检测到凋亡峰;高浓度药物作用时,DNA呈Ladder断裂,FCM检测到凋亡峰,但荧光显微镜下观察到PI着色和DNA凝聚共存.结论:(1)应慎重使用依据PI着色区分凋亡和坏死细胞的方法;(2)有些情况下,凋亡细胞经乙醇固定后DNA断裂片段的逸出是一个缓慢的过程,通过4℃重悬可提高流式细胞仪检测凋亡细胞的准确性.
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肺癌细胞A549中过表达PRR11影响Vimentin组装
目的:探索富脯氨酸蛋白11(Proline-rieh protein 11,PRR 11)过表达诱发染色体凝聚异常的分子机理.方法:综合利用瞬时过表达、siRNA敲减和免疫荧光染色方法在人肺癌细胞系A549中过表达或沉默PRR11后,检测波形蛋白(Vimentin)的表达与亚细胞分布及染色质凝聚异常情况.结果:肺癌细胞中内源性PRR11在胞浆中呈现弥散型分布,而Flag-PRR 11过表达后在细胞中的分布呈现弥散状和网络状两种不同形态.进一步检测发现内源性或外源过表达PRR11与Ⅲ型中间丝蛋白Vimentin共定位,并且导致Vimentin绕核分布紊乱及染色质凝聚异常.结论:在细胞周期过程中PRR11与Vimentin共定位并调节其组装过程.推测PRR11异常表达可能通过与Vimentin共定位导致核骨架核纤层不稳定并诱发染色质异常凝聚,从而促进肿瘤的发生发展.
