您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
信号传导通路抑制因子1文献资料
-
人树突状细胞SOCS1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定
目的 构建大树突状细胞(hDCs)信号传导通路抑制因子1(SOCS1)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体.方法 根据人树突状细胞SOCS1基因(NM-0037),筛选出一个靶序列,设计并合成包含正反义靶序列的互补单链寡核苷酸,与经BamH和Xho酶切后的慢病毒载体质粒pRNA-Lenti-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)(含U6启动子和EGFP)连接产生pRNA-Lenti-SOCS1-EGFP慢病毒重组质粒,与慢病毒包装混合物共转染293T细胞,包装产生慢病毒,收集病毒上清,采取系列稀释法测定慢病毒滴度.然后转染hDCs,通过荧光显微镜观察细胞转染情况,利用荧光实时定量PCR和Western blot检测干扰组、阴性对照组、空白对照组SOCS1的表达情况.结果 将目的序列成功连接到载体上,并经测序分析证实载体构建成功.荧光实时定量PCR及Western blot检测显示慢病毒重组质粒感染hDCs后,与空白对照组及阴性对照组比较,siRNA组mRNA和SOCS1蛋白的表达量显著降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 构建的pRNA-Lenti-SOCS1-EGFP慢病毒载体可有效地抑制hDCs的SOCS1的表达,为进一步研究DCs增强抗肿瘤免疫应答效应奠定基础.
关键词： 人树突状细胞 信号传导通路抑制因子1 RNA干扰
