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信使核糖核酸差异显示法文献资料
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抗呼吸道合胞病毒感染的新药物作用靶点的筛选
目的 为了筛选潜在的抗呼吸道合胞病毒药物作用靶标,以呼吸道合胞病毒感染相关的基因为靶标来构建抑制RSV感染的pSUPER RNAi表达载体,通过体外抗病毒实验进行验证,后筛选出有效的靶基因.方法 利用信使RNA (mRNA)差异显示法,获得特定细胞差异表达的mRNA差异显示谱,通过电子克隆获得这些EST片段的电子延伸产物,得到三十余条与RSV感染密切相关的基因.从中选取部分基因序列作为靶点,化学合成2条编码短发夹RNA序列的寡核苷酸链克隆到pSUPER载体上,构建若干靶向呼吸道合胞病毒感染细胞的相关基因的RNAi质粒.通过体外抗病毒实验来筛选有效的作用靶标结果.结果 本研究设计的siRNA序列克隆到了pSUPER上相应位置,序列正确.针对RSV基因构建的重组质粒pshRNA-ZQ06/16/20/26均可减轻RSV所致的细胞病变,降低病毒滴度,重组质粒对细胞生长无明显细胞毒性作用,通过噻唑蓝比色法(MTT)从mRNA水平分析并确定了该RNAi效应对靶基因有特异性抑制作用.结论 重组质粒pshRNA-ZQ06/20/26较pshRNA-ZQ16抗RSV作用要强.
