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shRNA真核表达载体文献资料
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pGenesil-1-MCHR2-shRNA对MCHR2与其放射性配体结合的影响
目的 研究人黑色素浓集激素受体2(MCHR2)基因特异的小发夹RNA(shRNA)真核表达载体(pGenesil-1-MCHR2-shRNA)对MCHR2与其放射性配体结合特征的影响.方法 将pGenesil-1-MCHR2-shRNA表达载体转染到稳定表达人MCHR2基因的中国仓鼠卵巢细胞CHO中,通过放射性配体结合实验(RBA)检测受体大结合容量(Bmax)及平衡解离常数(Kd值)的变化.结果 与转染pGenesil-1空载体组比较,pGenesil-1-MCHR2-shRNA使Bmax减少39.4%～78.7%,Kd值升高40.9%～81.9%.结论 MCHR2基因shRNA真核表达载体能有效减少Bmax、升高Kd值,为利用RNA干扰技术研究人MCHR2基因功能奠定良好的实验基础.
关键词： MCHR2 shRNA真核表达载体 放射性配体结合特征 -
凋亡抑制蛋白Livin shRNA真核表达载体的构建
目的 设计构建Livin的shRNA真核表达载体,并转染宫颈癌HeLa细胞,进一步研究该表达载体对目的基因Livin的沉默效果,为宫颈癌基因治疗探索新方法.方法 以Livin为靶基因,以Pgenesil-1质粒为载体,构建重组体,根据Livin基因cDNA序列,设计shRNA寡核苷酸序列,退火后克隆到空载体Pgenesil-1中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行酶切鉴定和测序分析.将构建好的真核表达载体转染宫颈癌HeLa细胞.结果 经酶切鉴定出的重组体测序结果与目的序列相同,重组载体构建成功,并被成功转入宫颈癌HeLa细胞,可见绿色荧光蛋白表达,48 h转染效率高.结论 利用RNA干扰技术可成功构建小干扰RNA重组体,为进一步研究宫颈癌基因治疗奠定基础.
关键词： Livin shRNA真核表达载体 Hela细胞
