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吉西他滨诱导神经胶质瘤细胞凋亡及其对促凋亡因子Bax/Bak的影响
目的:研究抗癌药物吉西他滨(Gemcitabine,Gem)对人神经胶质瘤U87细胞的凋亡以及其对促凋亡因子Bax/Bak的影响.方法:MTT法检测0(对照组)、0.5,1,5,10 μmol· L-1的Gem对U87细胞增殖的影响以及5μmol·L-1 Gem处理U87细胞12,24,36,48 h后的细胞活性.细胞核特异性染料DAPI核染后共聚焦显微镜下观察Gem处理的U87细胞核型的变化.流式细胞仪结合染色和免疫荧光技术检测细胞的凋亡情况、细胞周期分布以及Bax/Bak活化情况.Western blot检测shRNA基因沉默前后Gem引起的细胞内Bax/Bak蛋白的表达情况.MTT法检测沉默Bax/Bak后Gem对U87细胞活力的影响.结果:Gem对U87细胞活性的影响具有显著的浓度和时间依赖性.5μmol· L-1的Gem处理细胞12,24,36,48 h后细胞活力分别(79±3.2)％、(41.2±2.6)％、(27.9±3.1)％、(20.4±1.7)％.Gem处理U87细胞后细胞核明显固缩并形成凋亡小体.Gem引起细胞凋亡,5μmol· L-1Gem处理的细胞凋亡率为(45.9±2.6)％,显著高于对照组的(3.1±1.8)％.Gem能够显著将细胞阻滞在Sub-G1和S期(P＜0.01),并明显引起细胞内Bak的活化而没有引起Bax的活化(P＜0.01).与对照组相比,5 μmol· L-1的Gem处理U87细胞后,沉默Bak基因很好的抑制了Bak蛋白的表达而没有抑制Bax蛋白的表达.后发现,沉默Bak明显抑制了Gem对U87细胞的毒性(P＜0.01),而沉默Bax相比Gem单独用药组没有明显变化.结论:Gem能够抑制U87细胞的增殖并引起细胞凋亡,在凋亡通路中引起细胞Sub-G1和S期的阻滞,并且导致细胞内Bak而非Bax的活化而促进凋亡.
