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miR-127-3p通过下调靶基因MAPK4抑制神经胶质瘤增殖的机制研究
目的 探讨miR-127-3p在神经胶质瘤中的表达水平差异及生物学作用.方法 用RT-PCR法检测神经胶质瘤患者及健康人群脑脊液中miR-127-3p相对表达水平;用RT-PCR法检测人神经胶质瘤细胞株和人正常神经胶质细胞中的miR-127-3p相对表达水平;用瞬时转染法上调神经胶质瘤细胞U251中的miR-127-3p相对表达水平,用MTT法检测细胞增殖,用流式细胞术检测细胞凋亡,用Western blot检测凋亡相关蛋白bcl-2、Mcl-1和bax表达水平;Targetscan等在线靶基因预测软件预测miR-127-3p的靶基因,并采用双荧光素酶报告试验和Western blot验证miR-127-3p与靶基因之间的直接作用关系.结果 神经胶质瘤患者(1.33±0.12)脑脊液中的miR-127-3p相对表达水平低于健康人群(3.62±0.26)(t=5.867,P=0.004);U251(0.59±0.05)、U373(0.96±0.08)、U87(0.77±0.03)、SHG44(1.28±0.05)中miR-127-3p相对表达水平均低于人脑正常胶质细胞株HEB(3.64±0.26) (P＜0.01);转染后24、48、72 h 150组、100组和50组细胞吸光度值均低于对照组(P＜0.05),并且随着miR-127-3p mimics转染水平增高,U251细胞吸光度值越低;miR-127-3p mimics转染组(39.3±4.6％)细胞早期凋亡率高于对照组(7.2±0.6％) (P＜0.05);miR-127-3pmimics转染组(9.3±2.3％)细胞晚期凋亡率高于对照组(2.4±0.5％)(P＜0.05);mimic转染组(0.119±0.008)U251细胞bcl-2蛋白表达水平低于对照组(0.556±0.039),mimic转染组(0.168±0.015)U251细胞bax蛋白表达水平高于对照组(0.086±0.006),mimic转染组(0.144±0.009)U251细胞Mcl-1蛋白表达水平低于对照组(0.426±0.028)(P均＜0.05);双荧光素酶报告基因实验显示,只有当MAPK4-WT-3 UTR与miR-127-3pmimic共同转染时荧光素酶活性被抑制,这提示miR-127 3p能与MAPK4直接结合,miR-127-3pmimic转染组(0.121±0.003)U251细胞MAPK4蛋白表达水平低于对照组(0.467±0.028) (P＜0.05).结论 miR-127-3p在神经胶质瘤患者脑脊液中呈低表达,上调miR-127-3p能抑制神经胶质瘤U251细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控Bcl凋亡相关基因及抑制靶基因MAPK4有关.
关键词： 神经胶质瘤 微小RNA-127-3p 丝裂原活化蛋白激酶4 细胞凋亡
