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不同浓度γ干扰素诱导大鼠脾脏来源树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的变化及对T淋巴细胞增殖的影响
目的 观察不同浓度γ干扰素(IFN-γ)作用下大鼠脾脏来源的树突状细胞(DC)中吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO) mRNA和蛋白表达的变化及IDO对同种异体T淋巴细胞增殖的影响.方法 应用细胞因子体外诱导培养大鼠脾脏来源DC,应用流式细胞仪测定大鼠DC特异性分子OX62 和表面分子CD80、CD86的表达.分别用不同浓度(0、100、300、500 U/ml)的IFN-γ诱导作用DC后,实时聚合酶链反应( Real-time PCR)测定DC中IDO mRNA的相对表达水平,Westemblot检测DC中IDO蛋白在DC中的表达水平.同种异体混合淋巴细胞反应(MLR)检测不同浓度IFN-γ诱导后的DC对同种异体T淋巴细胞增殖的影响.结果 体外诱导培养的DC光学显微镜下观察,具有典型的树枝状突起.0X62表达率达到80％以上,CD80、CD86的阳性表达也在80％左右；DC的IDOmRNA(2 -△△Ct值分别为:1.010 ±0.094、1.340±0.114、1.700±0.087、2.080±0.150)和蛋白的相对表达量(分别为:0.861 ±0.612、1.155±0.059、1.308±0.068、1.755±0.118)随着IFN-γ作用浓度的增大逐渐增大,分别为:不同浓度组间差异有统计学意义(P＜0.05)；各组IFN-γ作用后DC与对照组比较,T淋巴细胞的增殖率显著降低(P＜0.05)；且随着IFN-γ作用浓度的增大T淋巴细胞的增殖率逐渐降低,A值分别为:0.458±0.041、0.423±0.030、0.349±0.019、0.312±0.036,各组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 采用改良的培养黏附法体外获得纯度较高的大鼠脾脏来源的DC；IFN-γ可以诱导大鼠脾脏来源DC表面活性IDO的表达增加,减弱脾脏DC对同种T细胞增殖的刺激能力.
