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微小RNA-21真核表达载体构建及其对甲状腺乳头状癌细胞程序性细胞凋亡4蛋白的影响
目的 构建微小RNA (miR)-21的真核表达载体pEZX-eGFP-microRNA-21.将构建成功的pEZX-eGFP-microRNA-21瞬时转染至甲状腺乳头状癌细胞株TPC-1中,探讨转染前后细胞蛋白程序性细胞凋亡4(PDCD4)蛋白的表达差异及其机制.方法 人工合成microRNA-21基因序列,构建成重组质粒pEZX-eGFP-microRNA-21并转染TPC-1细胞.将TPC-1细胞分为转染组、空载组、空白组,每组20个复孔.实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)、Western blot分别检测转染后miR-21及PDCD4蛋白在各组细胞中的表达.结果 经酶切和测序分析鉴定后证明重组质粒pEZX-eGFP-microRNA-21构建成功.转染组TPC-1细胞miR-21的表达水平明显高于对照组:加尾法、茎环法中分别是对照组的6.39倍(P＜0.01)、7.58倍(P＜0.01).Western blot显示转染组细胞PDCD4表达量明显降低(0.24±0.03,P＜0.05).结论 成功构建miR-21基因真核表达载体pEZX-eGFP-microRNA-21.miR-21在甲状腺乳头状癌细胞TPC-1中高表达可能导致PDCD4蛋白低表达.
