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dsRNA表达质粒文献资料
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p21基因的saRNA表达质粒的构建及功能研究
目的 构建可表达具有RNA激活功能的小激活RNA(saRNA)质粒表达载体,并对其激活前列腺癌细胞PC-3中p21WAF1/CIP1(p21)基因表达的功能进行相关研究.方法 人工合成与p21基因启动子特定序列相应的DNA片段及同样长度的随机DNA序列,利用DNA重组技术将这些片段构建到真核小分子双链RNA(dsRNA)表达质粒pGenesil-1中,构建成能表达dsRNA片段的表达质粒载体(dsRNAp21-pGenesil-1)和随机对照dsRNA片段的表达质粒载体(dsRNACon-pGenesil-1).采用脂质体介导方法,分别将dsRNAp21-pGenesil-1(实验组)、dsRNACon-pGenesil-1(随机对照组)及空白质粒pGenesil-1(空白对照组)转染到体外培养的PC-3细胞,通过荧光染色检测转染效率,采用RT-PCR和免疫组化技术检测各组细胞p21蛋白表达的差异.结果成功构建目的 表达载体dsRNAp21-pGenesil-1及随机对照载体dsRNACon-pGenesil-1,将各组质粒转染到PC-3细胞后,实验组p21基因表达明显增强,而随机对照组和空白对照组无明显变化.结论 本研究构建的dsRNA表达质粒载体能成功表达saRNA分子,并激活p21基因及蛋白的表达,为研究saRNA的RNA激活效应提供有效工具.
