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小分子双链 RNAs 联合应用抑制膀胱癌细胞增殖的实验研究
目的在膀胱癌细胞系 T24和 EJ 细胞中转染两种不同的人工合成小分子双链 RNA (dsRNA),观察联合应用与分别单独应用两种 dsRNA 对膀胱癌细胞生长的影响.方法根据对膀胱癌细胞的处理不同分为：①阴性对照组(dsControl)、dsP21-322组、dsP21-555组和 dsP21-322＋dsP21-555组；②dsControl 组、dsP21-322组、dsP53-285组和 dsP21-322＋ dsP53-285组.采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测各组细胞 p21 mRNA 及细胞周期依赖性激酶 CDK4、CDK6 mRNA 的表达；蛋白印迹法(Western blot)检测 P21蛋白和 CDK4、CDK6蛋白的表达；细胞增殖实验检测转染后细胞增殖能力；集落形成实验检测单个细胞克隆增殖能力.结果 qPCR 结果显示,与 dsControl 组相比,dsP21-322组、dsP2l-555组和 dsP53-285组均分别上调 T24和 EJ 细胞中p21 mRNA 的表达(P ＜0．01)；而与单独转染 dsP21-322、dsP2l-555相比,同时转染 dsP21-322＋dsP21-555,差异无统计学意义(P ＞0．05).与 dsControl 组相比,dsP53-285能够上调 p53基因的表达(P ＜0．05)；与单独转染 dsP53-285相比,p53 mRNA 表达在同时转染 dsP21-322和 dsP53-285组中差异无统计学意义(P ＞0．05).与单独转染 dsP21-322、dsP53-285相比,dsP21-322＋ dsP53-285能够显著增加 p21 mRNA 的表达(P ＜0．05).与 dsControl 相比,转染 dsP21-322、dsP53-285分别使 T24和 EJ 细胞中 CDK4、CDK6 mRNA 的表达下调(P ＜0．05)；与单独转染 dsP21-322、dsP53-285相比,CDK4/6 mRNA 的表达在 dsP21-322＋dsP53-285组中明显被抑制(P ＜0．05).Western blot检测结果验证了组间 p21和 CDK4/6基因表达的差异.细胞增殖实验结果显示,同时转染 dsP21-322和 dsP53-285比单独转染抑制膀胱癌细胞增殖能力更明显.细胞集落形成实验中,dsP21-322＋dsP53-285组中形成的集落数量显著少于单独转染组.结论同时转染 dsP21-322和 dsP53-285能够显著抑制膀胱癌细胞的增殖.
