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肌球蛋白ⅡB对人脐静脉血管内皮细胞中肿瘤坏死因子受体1转位影响的观察
目的:观察非肌肉肌球蛋白重链Ⅲ B(nonmuscle myosin heavy chain ⅡB,NMHC-ⅡB)对人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中肿瘤坏死因子受体1(TNF receptor 1,TNFR 1)转位的影响.方法:将成功构建的重组pEGFP-N1/TNFR 1载体通过阳离子脂质体Lipofectin介导的方法转染人HUVECs,筛选获得稳定克隆株.设计并合成NMHC-ⅡB的小分子干扰RNA(small interference RNA,siRNA),用脂质体LipofectamineTM2000转染进入该稳定克隆株,差速离心加蔗糖密度梯度离心收获细胞质膜,Western印迹法观察TNFa诱导前和诱导后细胞质膜上TNFR 1蛋白含量的变化.结果:与空白对照组比较,转染NMHC-ⅡB siRNA组进入HUVECs,可以明显抑制细胞内NMHC-ⅡB mRNA的表达[(0.670 4±0.024 2):(0.454 0±0.041 1),P＜0.01],也可以明显减少TNFa诱导前[(0.430 6±0.028 9):(0.324 8±0.016 7),P＜0.01]和诱导后[(0.660 9±0.026 5):(0.492 2±0.021 7),P＜0.01]细胞质膜TNFR 1的含量.在转染NMHC-ⅡB siRNA的细胞,TNFa的诱导仍然可以提高细胞质膜TNFR 1的含量,诱导前、后比较[(0.324 8±0.016 7):(0.492 2±0.021 7),P＜0.01].结论:NMHC-ⅡB可能在TNFR 1从反式高尔基体到细胞质膜的转位或运输中起正向作用.但是可能并不是惟一的或决定性的因素.
