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泛素交联酶RAD6在DNA损伤修复中的作用
RAD6初是在酿酒酵母(S.cerevisiae)中发现的一种具有催化H2B单泛素化活性的泛素交联酶(E2),它具有一个UBCc结构域.早些年,人们对泛素系统在DNA损伤修复(DNA-damage repair,DDR)中的作用了解非常有限.近年来,泛素在DNA损伤修复中蛋白质招募过程中扮演的广泛角色逐渐被人们所认识.RAD6高度保守,能与多个泛素连接酶相互作用,在DDR中发挥重要作用.
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Rad6在脑胶质母细胞瘤中的表达及临床意义
目的：研究Rad6在脑胶质母细胞瘤中的表达及临床意义。方法：在组织水平，使用免疫组织化学方法检测32例脑胶质母细胞瘤组织及21例瘤旁正常组织中Rad6的表达，应用SPSS17.0统计软件，分析Rad6表达与临床病理参数及预后的关系。结果：Rad6在胶质母细胞瘤组织及瘤旁正常组织中阳性率分别为65.63%、28.57%(χ2=6.97；P=0.009)。经Kaplan-Meier法生存比较，Rad6的阳性表达者比阴性表达者生存期短(P<0.05)。Rad6蛋白的表达与患者的年龄、性别、肿瘤部位、血管密度、肿瘤直径及坏死无关，差异无统计学意义(P>0.05)。结论：Rad6过度表达与脑胶质母细胞瘤有关，有望成为胶质母细胞瘤新的预后基因。
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泛素结合酶RAD6多克隆抗体的制备及初步鉴定
目的：为了给RAD6参与的泛素化修饰相关领域的研究提供参考，在大肠杆菌中原核细胞表达GST-RAD6重组蛋白并通过免疫家兔制备其多克隆抗体。方法以cDNA文库作为模板，构建重组载体pET41a-GST-RAD6，转化至大肠杆菌表达菌株BL21中，诱导表达并纯化GST-RAD6融合蛋白，免疫家兔后制备其多克隆抗体，通过Western-Blot检测及染色质免疫共沉淀鉴定其特异性及效价。结果成功构建了pET41a-GST-RAD6重组载体，得到了高纯度的重组蛋白，Western-Blot检测及染色质免疫共沉淀鉴定显示获得的血清抗体效价高，特异性强。结论成功制备的高效价兔抗人RAD6血清抗体可为RAD6调控的泛素化修饰相关领域的研究奠定基础。
