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可溶性无机焦磷酸酶文献资料
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滇重楼可溶性无机焦磷酸酶基因的克隆及原核表达研究
目的 为了研究可溶性无机焦磷酸酶(soluble inorganic pyrophosphatase,sPPase)基因在滇重楼生长发育中的功能,对滇重楼的sPPase基因进行了克隆、序列分析和原核表达研究.方法 根据滇重楼cDNA文库中筛选到的sPPase的EST序列,克隆了滇重楼可溶性无机焦磷酸酶基因PpsPPase的cDNA全长序列;运用生物信息学的方法对该序列进行相似性比较和同源性分析,预测编码蛋白,并对其进行各种理化性质分析;将PpsPPase插入到原核表达载体pEASY-E1上,并导入到大肠杆菌BL21 (DE3)细胞中进行诱导表达.结果 滇重楼中PpsPPase的开放阅读框ORF为621bp,编码206个氨基酸,与高粱中sPPase的氨基酸序列相似性高为94％;PpsPPase编码的蛋白相对分子质量是23.4kDa,理论等电点pI为5.6,特异识另区域即位于98-104位之间即DNDPMDV.成功构建了原核表达载体pEASY-E1-PpsPPase,并导入到大肠杆菌BL21(DE3)细胞中,经SDS-PAGE分析表明PpsPPase在大肠杆菌中能够表达,当1PTG诱导2h时表达量较高.结论 首次从滇重楼中克隆得到可溶性无机焦磷酸酶基因PpsPPase,为滇重楼生长发育分子机制的研究提供参考.
