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骨髓增生异常综合征患者骨髓高分辨染色体的制备与分析
目的:了解高分辨染色体的制备方法在骨髓增生异常综合征(MDS)患者染色体核型分析中的应用价值.方法:随机选择160例MDS患者,同时应用常规方法和高分辨染色体的制备方法制备骨髓染色体.常规染色体的制备:患者骨髓经短期(24 h)培养后,加入秋水仙胺,37℃孵育1 h后收获细胞.骨髓高分辨染色体的制备:取初诊MDS患者骨髓,按有核细胞(1.5～2.0)×106mL-1接种子RPMI 1640培养基中,置37℃恒温箱中,培养48h.在收获前2 h加溴化乙锭(EB),再于收获前1 h加入秋水仙胺,按常规方法制片,G-显带.以同期住院的40例非恶性血液系统疾病患者为对照.结果:应用高分辨染色体制备方法制备出的骨髓染色体,每一单倍体带达550条左右.在160例MDS患者中,共发现90例骨髓染色体数目或结构异常,其中-5/5q-17例,-7/7q-31例,-Y 11例,t(9,22)15例,其余16例为4、6、10、11号染色体异常.应用常规染色体制备方法制备的骨髓染色体核型分析结果与高分辨染色体方法制备的骨髓染色体相同,但每一单倍体带在400条左右.40例非恶性血液病患者骨髓染色体未发现数目和结构异常.结论:骨髓高分辨染色体可检出更多的异常染色体,并可确定精细的断裂点.
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比较基因组杂交技术的研究进展
比较基因组杂交是在荧光原位杂交的基础上建立起来的一种细胞-分子遗传学技术.该技术无需细胞培养,通过1次检测即能筛查整个基因组DNA拷贝数的增减,检测周期短,效率高.在染色体数目异常、染色体复杂结构异常及标记染色体来源判定等方面均具有明显的诊断优势,已被广泛应用于寻找肿瘤、出生缺陷及遗传病的染色体致病位点和探索新的肿瘤相关基因及遗传综合征等领域.高分辨染色体制备技术及基因克隆技术的先后引入将比较基因组杂交技术的分辨率不断提高,使之真正成为了连接细胞遗传学与分子遗传学的桥梁技术.高分辨比较基因组杂交技术因耗费低、可行性高而具有较高的临床推广价值.
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人外周血淋巴细胞高分辨染色体制备技术的研究
目的:建立一种具有分裂指数高和染色体分散好等优点的550～850条带纹高分辨染色体的制备方法.方法:取10例健康人外周血为样本制备淋巴细胞高分辨染色体.固定5-氟尿嘧啶核苷、尿嘧啶核苷、胸腺嘧啶核苷、溴化乙锭、秋水仙胺的剂量,进行5个因素3个水平的正交设计15种实验方案.5个因素分别为培养时间、胸腺嘧啶核苷、溴化乙锭、秋水仙胺作用时间以及低渗时间.3个水平分别为培养时间64、72、80 h；胸腺嘧啶核苷作用时间16、17、18 h；溴化乙锭作用时间3、4、5h;秋水仙胺作用时间10、15、20 min以及低渗时间30、40、50 min.每例样本同时采用15种方案进行实验,比较各方案带纹在550条以上时染色体分裂指数和分裂相分散的情况.结果:在15种方案中培养时间以及秋水仙胺作用时间对分裂指数有显著影响(P＜0.01),其中培养72 h后加5-氟尿嘧啶核苷和尿嘧啶核苷进行同步化和秋水仙胺作用15 min高分辨染色体分裂指数大.37℃低渗40 min高分辨染色体分散效果佳.结论:本实验方案的高分辨染色体制备方法,具有分裂指数高和染色体分散好等优点,具有较好的推广价值.
