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CTP-Ub-HBcAg原核表达载体的构建及其表达
目的 构建CTP-Ub-HBcAg原核表达载体并诱导和鉴定其融合蛋白的表达.方法 以质粒pcDNA3.1(-)-Ub-HBcAg中的Ub-HBcAg融合基因为模板设计引物,上游引物带有CTP基因序列,进行PCR扩增,PCR产物克隆到原核表达质粒pMAL-c2x中,菌落PCR阳性克隆测序鉴定,鉴定正确的质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达,并进一步通过直链淀粉树脂亲和层析法纯化融合蛋白,Western blotting鉴定.结果 PCR扩增得到820 bp大小的条带,为CTP-Ub-HBcAg融合序列.该序列被克隆至表达质粒pMAL-c2x中,阳性克隆菌落测序正确,并在DE3中获得诱导表达.Western blotting鉴定为70 KD的CTP-Ub-HBcA融合蛋白.结论 构建CTP-Ub-HBcAg原核表达载体并成功表达,为进一步研究该融合蛋白的功能提供了实验基础.
