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Balb-c小鼠文献资料
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HPV16型E6蛋白单克隆抗体制备及检测
目的 制备人乳头瘤状病毒(human papillomavirus,HPV) 16型E6蛋白单克隆抗体并对其进行检测.方法 15只Balb-c小鼠分为3组,各5只.设计3条HPV16 E6抗原多肽分别对3组小鼠进行免疫,筛选得到对B细胞表位有较高活性的线性多肽HPE601,并用该组的小鼠脾脏制备杂交瘤细胞.采用间接ELISA法对小鼠血清进行阳性克隆筛选和检测抗体效价,采用考马斯亮蓝染色鉴定抗体纯度,采用标准曲线计算抗体浓度,采用Western blot法检测并采用间接免疫荧光法验证纯化E6抗体对Caski、Hela和正常宫颈上皮细胞核蛋白特异性结合情况.行宫颈组织活检患者20例,其中HPV16型宫颈组织7例,HPV18型宫颈组织6例和正常宫颈组织7例,采用免疫荧光法检测单克隆抗体对3种组织的检出率.结果 制备得到单克隆抗体Whu001,经鉴定抗体纯度较好,该克隆能特异性识别HPV16型E6蛋白;Whu001对HPV16型组织的检出率(80％)明显高于HPV18型宫颈组织(15％)和正常宫颈组织(0),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成功筛选出了针对HPV16 E6抗原的单克隆抗体,其对HPV16的诊断具有特异性,为在蛋白水平上检测HPV E6蛋白提供了新途径.
关键词： 单克隆抗体 HPV16型E6蛋白 Balb-c小鼠
