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应用SNPs技术确定C.elegans形成异常习惯化的基因位置
目的 应用SNPs技术确定影响C.elegans的习惯化形成异常基因hab-1(cn308)的准确基因位置.方法 (1)在C.elegans基因库里,检索连锁于第一常染色体上CB4856的Y71A12B的SNP标记(22.330MU)和C37A5的SNP标记(23.410MU),其基因型设为YC/YC,hab-1(cn308)的基因型为h/h.(2)把虫子进行同步化处理,同一虫子的大小.(3)野生型的雄性CB4856与雌雄同体cn308进行三因子杂交.对F1进行Tap测试,同时记录虫子的反应距离,统计处理,筛选习惯化和维持正常的杂合子(YC/h),传代至F2.(4)对F2代再进行Tap测试,筛选习惯化形成缓慢、习惯化维持时间短的虫子,进行PCR,用限制性内切酶消化,2%琼脂糖凝胶电泳分离目的 片段.结果 (1)第1次Tap测试结束后野生型的习惯化形成明显快于cn308[对Tap刺激形成习惯化均数(移动距离均数,单位:mm),野生型为(0.414±0.049)mm,cn308为(0.777±0.062)mm,t=10.08,P<0.01],1 h后习惯化维持测试中,发现野生型的习惯化维持时间明显长于cn308(习惯化维持均数,野生型为(0.307±0.041)mm,cn308为(0.815±0.054)mm,t=11.54,P<0.001).(2)分析SNPs片段,统计Y71A12B的SNP标记与hab-1、C37A5的SNP标记与hub-1之间的基因重组数,观察H non C的表现型,即Ch/h:20,Yh/h:6,测算重组比例可知hab-1离Y71A12B的SNP标记距离是0.831MU,hab-1离C37A5的SNP标记距离是0.249MU,所以确定hab-1位于Y71A12B的SNP标记和C37A5的SNP标记之间.结论 影响C.elegans对无伤害性Tap重复刺激形成异常习惯化的hab-1基因位置是23.161MU.
