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骨髓间充质干细胞条件培养基对小鼠肺泡上皮细胞增殖的影响及机制
目的 探讨骨髓间充质干细胞条件培养基(BMSCs-CM)对小鼠肺泡上皮细胞增殖的影响及机制.方法 分离与培养小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),流式细胞仪检测细胞表面标记物示CD44阳性表达率为92.5％、CD34阴性表达率为97.3％,提示成功分离与培养BMSCs,且纯度较高.当第2代细胞融合70％～80％时,提取BMSCs-CM.将人肺泡上皮细胞A549随机分为对照组、无血清组、BMSCs组、BMSCs-CM组.对照组以含10％血清的DMEM/F12培养基培养,无血清组以无血清的DMEM/F12培养基培养,BMSCs组加入已接种小鼠BMSCs的Transwell用无血清的DMEM/F12培养基共培养,BMSCs-CM组以获取的小鼠BMSCs-CM培养.培养24 h时,采用CCK-8法检测各组细胞相对存活率.将体外常规培养的肺泡Ⅱ型细胞(ATⅡ)随机分为对照组、BMSCs-CM组,对照组以无血清的DMEM/F12培养基培养24 h,BMSCs-CM组以获取的小鼠BMSCs-CM培养24 h,采用RT-PCR法检测钠通道蛋白α(α-ENaC)相对表达量.结果 无血清组细胞相对存活率为(80.70±0.70)％,BMSCs组为(85.83±1.98)％,BMSCs-CM组为(91.28±1.91)％,BMSCs组与BMSCs-CM组均高于无血清组(P<0.05或<0.01).对照组 α-ENaC相对表达量为1.00±0.00,BMSCs-CM组为3.16±1.50,两组比较P<0.05.结论 BMSCs-CM可促进肺泡上皮细胞增殖,其作用机制可能与促进肺泡Ⅱ型细胞α-ENaC表达有关.
