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IL-25通过nuocyte细胞诱导哮喘小鼠气道重塑
目的：探索白细胞介素-25（IL-25）通过 nuocyte 细胞对哮喘小鼠气道重塑的作用。方法30只 SPF 级BALB ／c 雌性小鼠随机分为对照小鼠组、哮喘小鼠组、抗 IL-25小鼠组，每组10只，鸡清卵蛋白（OVA）诱导哮喘模型。分离培养哮喘小鼠组 nuocyte 细胞，并分为对照细胞组、IL-25细胞组、抗 IL-25细胞组。HE 染色观察肺组织变化，流式细胞法计数肺泡灌洗液（BALF）中 nuocyte 细胞，ELISA 法检测 BALF 及细胞上清液中 IL-4、IL-13含量，免疫组化、Western blotting 及 RT-PCR 法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ胶原蛋白（collagen-Ⅰ）在肺组织中的表达。结果与对照小鼠组相比，哮喘小鼠组 BALF 中 IL-4、IL-13表达升高，nuocyte 细胞增多，α-SMA和collagen-Ⅰ表达升高（P ＜0．05），而抗 IL-25小鼠组表达无明显变化（P ＞0．05）；与对照细胞组相比，IL-25细胞组上清液 IL-4、IL-13表达增高（P ＜0．05），抗 IL-25细胞组上清液 IL-4、IL-13表达无明显变化（P ＞0．05）。结论IL-25可能通过 nuocyte 细胞促使 TH2型细胞因子分泌，导致哮喘小鼠气道重塑。
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nuocyte细胞体外诱导变应性鼻炎小鼠初始T细胞向Th2细胞的分化
目的:探讨nuocyte细胞是否可以在体外诱导AR小鼠的初始T细胞向Th2细胞分化.方法:用卵清蛋白建立变应性鼻炎(AR)小鼠模型,分离、提纯并体外培养小鼠鼻相关淋巴组织(NALT)中的nuocyte细胞,检测该细胞是否可以合成IL-4,获取AR小鼠外周血单个核细胞并分离出Th2细胞和T细胞进行体外培养,检测其中Th2细胞占T细胞百分比,然后将体外培养的NALT来源的nuocyte细胞加入上述小鼠T细胞培养液共培养,再次检测Th2细胞百分比.结果:AR小鼠模型的打喷嚏次数、挠鼻次数及鼻腔冲洗液中嗜酸粒细胞数均高于正常小鼠,以流式细胞仪技术将NLAT中nuocyte细胞鉴定为CD3CD4CD8CD19CD11 bCD11 cFcεR1 (lineage)-ICOS+,该细胞表达IL-4,而且AR小鼠nuocyte细胞中IL-4蛋白和mRNA含量均高于正常小鼠,nuocyte细胞与T细胞共培养后,Th2细胞所占T细胞百分比明显升高.结论:nuocyte细胞可能通过IL-4通路在体外诱导AR小鼠初始T细胞向Th2细胞分化.
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Orai1蛋白体外干预对小鼠nuocyte细胞功能的影响
目的 探讨nuocyte细胞是否表达Orai1蛋白及该蛋白的功能.方法 用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)建立小鼠变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)模型,计数AR小鼠的打喷嚏、挠鼻次数,分离、提纯并体外培养AR小鼠鼻相关淋巴组织(nasal-associated lymphoid tissue,NALT)中的nuocyte细胞,用激光扫描共聚焦显微镜定性检测该细胞Orai1蛋白的表达,以ELISA法和实时荧光定量RT-PCR法分别定量检测该细胞Orai1蛋白及其mRNA的表达量,将小鼠重组(recombinant,rm)白介素(interhukin,IL)-33加入nuocyte细胞培养基,检测其中IL-5和IL-13蛋白及其mRNA的浓度,然后再将Orai1蛋白抗体加入nuocyte细胞培养基,再次检测其中IL-5和IL-13蛋白及其mRNA的含量.结果 小鼠AR模型打喷嚏和挠鼻次数较正常小鼠显著增多,OVA诱导NALT来源的小鼠nuocyte细胞被鉴定为CD3CD4CD8CD19CD11bCD11 cFcεR1 (lineage)-ICOS+,该细胞表面表达Orai1蛋白,其蛋白和mR-NA含量均较正常小鼠显著升高,rmIL-33加入nuocyte细胞培养基后,IL-5和IL-13蛋白及其mRNA的浓度均明显增多,而加入Orai1蛋白抗体后,其浓度出现下降.结论 nuocyte细胞表达Orai1蛋白,该蛋白的干预抑制nuocyte细胞的正常功能.
