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卵巢癌耐药细胞株文献资料
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RNAi沉默卵巢癌耐药细胞株SKOV3/ADM内源H-ras基因表达对细胞增殖能力的影响
目的:构建靶向于卵巢癌耐药细胞株中高表达的H-ras癌基因的短发夹状RNA重组质粒,研究它对卵巢癌耐药细胞株SKOV3/ADM内源H-ras基因表达的抑制作用以及H-ras基因与卵巢癌发生和耐药的关系.方法:运用基因克隆技术构建靶向于Hras基因的重组质粒pshRNA/H-ras并转染至卵巢癌耐药细胞株SKOV3/ADM,通过Western blot、RT-PCR检测H-ras蛋白的表达及mRNA转录水平的变化;MTT法检测它对SKOV3/ADM细胞增殖的抑制作用,AO/EB实验检测pshRNA/H-ras对SKOV3/ADM细胞凋亡的影响.结果:构建的两重组质粒pshRNA/H-ras1、2均能明显抑制H-ras基因的表达.蛋白质印迹结果表明,转染重组质粒pshRNA/H-ras1、2的SKOV3/ADM细胞靶蛋白的抑制率分别为86.87%和92.21%,RT-PCR检测到H-ras基因mRNA转录水平下降;pshRNA/H-ras1、2明显抑制SKOV3/ADM细胞的增殖,MTT检测转染48h后的抑制率分别为62.4%和47.9%,AO/EB实验观测到转染24h和48h的细胞凋亡率分别为20.3%和35.6%.结论:H-ras基因在耐药的卵巢癌细胞增殖与凋亡过程中发挥作用,重组质粒pshRNA/H-ras可有效地抑制SKOV3/ADM细胞内源H-ras基因的表达和mRNA的转录,并抑制细胞的增殖和促进凋亡的发生,为化疗耐受的肿瘤细胞提供了新的基因治疗手段.
