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G2/M期停滞文献资料
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PPI1诱导人宫颈癌HeLa细胞G2/M期停滞及机制研究
目的:探讨I型磷酸酶抑制亚基1(PPI1)对人宫颈癌细胞系HeLa细胞周期的影响及其作用机制.方法:分别将PPI1野生型和短片段突变活化型基因通过脂质体介导转染人宫颈癌HeLa细胞,用RT-PCR和Western blot鉴定目的基因的表达;用流式细胞术分析瞬时转染HeLa细胞的细胞周期.对稳定转染的HeLa细胞用脱氧胸苷处理,通过流式细胞术观察PPI1对同步化HeLa细胞的细胞周期进展的影响.用免疫印迹分析细胞周期相关蛋白表达水平的变化.结果:野生型和突变活化型PPI1在HeLa细胞中均能有效表达.突变活化型PPI1基因的瞬时转染可使HeLa细胞G2/M期比例明显升高.经脱氧胸苷处理过的同步化的稳定转染的HeLa细胞中,突变活化型和野生型PPI1均可使HeLa细胞停滞在G2/M期的时间长于对照组,而且前者更明显.免疫印迹显示:突变活化型PPI1瞬时表达48h后,eyclin A、cyclin B1、p53和p21表达上调.经脱氧胸苷同步化并恢复正常培养基后,稳定表达突变活化型PPI1的细胞cyclin B1在10.5和12h,p53在6、7.5、9和10.5h表达明显增强;稳定表达野生型PPI1的细胞cyclin B1在10.5h的表达也比对照组明显增强.结论:突变活化型的I型磷酸酶抑制亚基1可诱导宫颈癌HeLa细胞G2/M期停滞,它与cyclin A和cyclin B1表达上调及cyclin B1降解滞后有关,而G2/M期停滞的维持与p53和p21表达上调有关.
关键词： 宫颈肿瘤 I型磷酸酶抑制亚基-1 G2/M期停滞 细胞周期蛋白质类 Hela细胞
