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N-乙酰-5-羟色胺的电化学检测研究
采用方波溶出伏安法(OSWSV),建立了N-乙酰-5-羟色胺的-种新型快速、灵敏的测定体系.实验研究了富集条件、pH值对方波溶出伏安法对N-乙酰-5-羟色胺的影响.在pH=9.33的硼砂-氢氧化钠缓冲液中,N-乙酰-5-羟色胺在约0.2V(vs.Ag/AgCl)电位处产生一个阳极氧化峰,峰电流与浓度在1.0×10-7～1.0×10-4mol·L-1范围内成线性关系,N-乙酰-5-羟色胺检测限为1.2×10-8mol·L-1.进行尿样样品测定,回收率为81.8%,结果良好.
关键词： N-乙酰-5-羟色胺 方波溶出伏安法 -
N-乙酰-5-羟色胺对视网膜缺血-再灌注损伤大鼠视网膜Fas、FasL蛋白表达的影响
目的 探讨N-乙酰-5-羟色胺(N-acetylserotonin,NAS)对视网膜缺血-再灌注损伤(retina ischemia-reperfusion injury,RIRI)大鼠视网膜Fas、FasL蛋白表达的影响.方法 取健康成年Sprague Dawley大鼠54只,将大鼠随机分为正常组(6只)、RIRI组(24只)与NAS组(24只);采用高眼压法建立大鼠RIRI模型,依据造模后不同时间点将RIRI组与NAS组大鼠又分为6h、12 h、24h及72 h四个亚组.NAS组于造模前30 min腹腔注射NAS(5 mg·kg-1),RIRI组腹腔注射等剂量的生理盐水.通过HE染色在光学显微镜下观察各组大鼠视网膜形态学变化,并记录各组大鼠视网膜厚度及视网膜神经节细胞数,采用免疫组织化学染色法检测NAS对RIRI大鼠视网膜Fas、FasL蛋白表达的影响.结果 HE染色显示,正常组大鼠视网膜各层细胞分界清晰,形态正常,神经细胞排列整齐;RIRI组大鼠再灌注后6h视网膜各层出现水肿,以神经节细胞层及内核层较显著,神经节细胞数较正常组减少;随后视网膜水肿进一步加重,神经节细胞继续减少;NAS组大鼠在再灌注后6h、12 h、24h视网膜水肿程度较RIRI组轻,NAS组在再灌注后72 h视网膜厚度较RIRI组厚,NAS组各时间点神经节细胞数均较RIRI组多,差异均有统计学意义(均为P＜O.05).免疫组织化学染色显示,正常组几乎未见Fas+细胞.再灌注后6h,RIRI组视网膜神经节细胞及内核层开始出现少量Fas+细胞;再灌注后12h,RIRI组视网膜Fas+细胞表达逐渐增多;再灌注后24h视网膜Fas+细胞数达到高峰,棕色阳性染色细胞分布在视网膜神经节细胞层、内丛状层、内核层及神经纤维层;再灌注后72 h视网膜Fas+细胞较再灌注后24h减少.NAS组在再灌注后6h、12 h、24h、72 h视网膜Fas+细胞数均较RIRI组各时间点减少,再灌注后24h,Fas+细胞数达较高水平,随后下降,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).正常组视网膜可见FasL全层低表达.RIRI组再灌注后6h,视网膜神经节细胞层和神经纤维层存在少量FasL+细胞;再灌注后12 h FasL蛋白表达逐渐增多;再灌注后24 hFasL+细胞数达高峰,可见深棕色的细胞膜及细胞质染色细胞分布在视网膜神经节细胞层、内丛状层、内核层及神经纤维层;再灌注后72 hFasL蛋白的阳性表达逐渐减少.NAS组再灌注后6h、12 h、24h、72 h视网膜FasL+细胞数均少于RIRI组各时间点阳性细胞数,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 NAS可通过抑制RIRI大鼠视网膜细胞Fas、FasL蛋白的表达,减轻缺血再灌注对大鼠视网膜细胞造成的损伤.
关键词： N-乙酰-5-羟色胺 视网膜缺血再灌注损伤 Fas FasL 大鼠 -
N-乙酰-5-羟色胺(NAS)对视网膜缺血再灌注损伤(RIRI)大鼠视网膜活性Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响
目的 探讨N-乙酰-5-羟色胺(N-acetylserotonin,NAS)对视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)大鼠视网膜活性Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响.方法 取健康成年Sprague-Dawley大鼠66只,采用随机数字表法随机分为正常对照组(6只)、缺血再灌注组(30只)与药物组(30只),药物组于造模前30 min腹腔注射5 mg·kg-1NAS,缺血再灌注组腹腔注射同等剂量的生理盐水,缺血再灌注组与药物组按RIRI后时间,分为6h、12 h、24 h、48 h、72 h五个亚组.采用HE染色法观察各组视网膜形态学变化,免疫组织化学染色检测各组大鼠视网膜活性Caspase-3、Bcl-2及Bax蛋白表达.结果 HE染色显示正常对照组大鼠视网膜结构清晰,各层细胞排列紧密;缺血再灌注组大鼠RIRI后6h、12 h视网膜各层高度水肿,24h后水肿逐渐减轻,神经节细胞逐渐减少,分布较紊乱,随着时间延长,视网膜神经节细胞大片缺失;药物组6h、12h较缺血再灌注组细胞水肿明显减轻,24h、48 h、72h组较缺血再灌注组细胞排列规整,神经节细胞数量减少减轻.缺血再灌注组视网膜活性Caspase-3阳性细胞数在灌注后6h开始表达增加,阳性细胞数为(561.15±37.19)个·mm-2,24 h达到较高水平,阳性细胞数为(1522.61±84.36)个·mm-2,随后逐渐下降,药物组视网膜各时间点活性Caspase-3阳性细胞数均显著少于缺血再灌注组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).正常对照组视网膜可见大量Bcl-2阳性细胞;缺血再灌注组RIRI后6 h Bcl-2阳性细胞开始下降,12h后继续减少,24h降至较低水平;药物组各时间点Bcl-2阳性细胞数均显著多于缺血再灌注组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).正常对照组大鼠视网膜几乎未见Bax阳性细胞;缺血再灌注组RIRI后6h神经节细胞层及内核层可见Bax阳性细胞,24h达到较高水平,48 h开始下降;药物组各时间点Bax阳性细胞均显著少于缺血再灌注组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 NAS可促进RIRI大鼠视网膜Bcl-2蛋白的表达,抑制Bax蛋白的表达,降低活性Caspase-3蛋白表达,减轻细胞凋亡,具有神经保护作用.
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N-乙酰-5-羟色胺对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用
目的:探讨N-乙酰-5-羟色胺(N-acetylseroton,NAS)对大鼠视网膜缺血再灌注损伤(Retinal Ischemia Reperfusion Injury,RIRI)的保护作用.方法:健康成年SD大鼠30只,随机数字表法分成3组:正常对照组、缺血再灌注组以及NAS组,每组10只.正常对照组不加干预;缺血再灌注组于造模前30min腹腔注射5mg/kg的生理盐水;NAS组于造模前30min腹腔注射5mg/kg的NAS.缺血再灌注组与NAS组采用加压灌注法制作视网膜缺血再灌注模型,各组动物均于造模72h后处死,HE染色法观察视网膜形态学变化,免疫组织化学法检测视网膜细胞Bcl-2蛋白和Bax蛋白的变化.结果:HE染色结果显示正常对照组大鼠视网膜结构清晰,各层细胞排列紧密;缺血再灌注组大鼠视网膜高度水肿,神经节细胞缺失且分布紊乱;NAS组较缺血再灌注组细胞水肿明显减轻,细胞排列趋于规整,神经节细胞数量减少程度有显著缓解.正常对照组视网膜可见大量Bcl-2阳性细胞,缺血再灌注组Bcl-2阳性细胞明显下降,NAS组Bcl-2阳性细胞数显著多于缺血再灌注组,差异具有统计学意义(P<0.05).正常对照组大鼠视网膜Bax阳性细胞较少,缺血再灌注组神经节细胞层及内核层可见大量Bax阳性细胞,NAS组Bax阳性细胞显著少于缺血再灌注组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:NAS可促进RIRI大鼠视网膜Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白表达,减轻细胞凋亡,对大鼠视网膜缺血再灌注损伤具有保护作用.
关键词： N-乙酰-5-羟色胺 视网膜缺血再灌注损伤 Bcl-2 Bax
