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食物中毒菌多联融合毒素Hc-VT1B-SEA-VT2B-SEB的表达及免疫学特性研究
目的 构建食物中毒菌多联融合毒素基因及重组表达载体,制备抗5种毒素的血清抗体.方法 采用一定的linker序列(G-P-G-P-G)将克隆的3种食物中毒菌的5个毒素基因片段进行串联,并定向克隆到表达载体pET-22b(+)的NcoI和XhoI位点之间,构建五联融合毒素基因及重组表达载体,表达产物经切胶回收初步纯化后免疫獭兔,制备抗血清,利用ELISA和琼脂扩散试验检测抗体和5种毒素反应的特异性和敏感性.结果 构建了重组融合毒素(命名为F5)Hc-VT1B-SEA-VT2B-SEB基因和重组表达载体F5-22b,且在表达宿主菌E.coli BL21中得到有效表达(9.90%),基因序列全长2 937bp,编码成熟蛋白979个氨基酸,融合蛋白分子量112.369ku,测序结果与设计序列(GenBank)100%同源.表达产物经初步纯化后免疫獭兔获得抗五种毒素的血清抗体,且具有较高的特异性和敏感性.结论 成功构建了融合毒素基因,获得了抗五种毒素的血清抗体,本实验结果为下一步建立食品广谱、快速免疫学检测新方法奠定了基础.
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食物中毒菌多联融合毒素F5基因的构建及结构分析
目的:构建食物中毒菌多联融合毒素基因并分析其是否保持了原来毒素基因的抗原特性.方法:采用一定的linker序列(G-P-G-P-G)将克隆的3种食物中毒菌5个毒素基因片段进行串联,构建重组融合毒素Hc-VTIB-SEA-VT2B-SEB(命名为F5)基因,应用DNAstar,对F5融合蛋白抗原特性等进行预测分析.结果:构建的融合毒素F5保留了5种毒素的抗原特性,基因全长序列2 937 bp,编码成熟蛋白979个氨基酸,测序结果与设计序列(GeneBank)100%同源.结论:成功构建了食物中毒菌多联融合毒素F5基因,为下一步研究融合毒素F5的表达及利用融合毒素检测食物中毒菌毒素建立广谱免疫学检测新方法奠定了基础.
