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体外培育牛黄镇痛作用的电生理机制
目的 探讨体外培育牛黄(calculus boris sativus,CBS)镇痛作用的电生理机制.方法 在蟾蜍坐骨神经干和培养大鼠三叉神经节(TRG)细胞上,分别记录复合动作电位和电压依赖性钠通道电流.结果 CBS(>0.4g·L-1)可以抑制复合神经动作电位,4 g·L-1CBS对其抑制率为(42.5±17.6)%.CBS(0.2～20 mg·L-1)可以剂量依赖性的抑制大鼠TRG细胞电压依赖性总钠通道电流(INa-T)和TTX不敏感型钠通道电流(INa-TTX-r),20 mg·L-1CBS对INa-T和INa-TTX-r的抑制率分别为(55.8±7.8)%和(39.3±5.7)%.结论 CBS对钠电流的阻滞作用可能是其镇痛作用机制之一.
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新生SD大鼠三叉神经元细胞的体外原代培养及鉴定
目的:建立新生SD大鼠三叉神经元细胞体外原代培养模型,为三叉神经的细胞学研究提供实验基础.方法:选取新生24 h以内SD大鼠24只,剥离脑组织,手术显微镜下分离大鼠三叉神经节,无菌剪碎后采用胰蛋白酶与DNA酶混合分次消化和机械吹打相结合的方法制备神经细胞悬液,接种于6孔板,倒置相差显微镜下观察细胞状态;免疫荧光染色鉴定神经元特异性抗原NeuN、β-tubulinⅢ的表达.结果:分离出来的三叉神经细胞4h后贴壁生长,并长出突起,随时间增加,突起变长并交错呈网络,培养至3～7 d神经细胞状态佳,随后逐渐凋亡,体外培养的神经细胞可生长15d,无增殖传代的能力;神经元特异性抗原NeuN、β-tubulinⅢ的表达阳性.结论:胰蛋白酶与DNA酶混合分次消化法可分离出大量三叉神经元细胞,为后续的细胞学研究提供实验基础.
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体外培育牛黄抑制大鼠三叉神经节细胞电压依赖性钙通道电流参与镇痛机制
目的:研究体外培育牛黄(CBS)对大鼠三叉神经节(TRG)细胞电压依赖性钙通道电流(ICa)的影响,探讨牛黄镇痛作用的电生理机制.方法:在培养大鼠TRG细胞上采用全细胞膜片钳记录ICa.结果:CBS能够剂量依赖性地抑制TRG细胞电压依赖性钙通道电流,0.2,2,20 μg·ml-1 CBS可使钙电流幅值分别减少(30.3±4.7)%、(41.9±3.6)%和(56.7±6.8)%(n=6,P<0.01).结论:CBS对钙电流的阻滞作用可能是其镇痛作用机制之一.
关键词： 体外培育牛黄 膜片钳 电压依赖性钙通道电流 三叉神经元
