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南赤瓟醇提物通过PI3K/Akt/mTOR信号通路促进人宫颈癌Caski细胞凋亡
目的:研究南赤瓟醇提物影响PI3 K/Akt/mTOR信号通路促进人宫颈癌Caski细胞凋亡的作用机制.方法:用南赤瓟醇提物(0.062 5、0.125、0.25、0.50、1.00、2.00 mg/mL)作用Caski细胞24 h后,检测其对细胞增殖的影响;然后用南赤瓟醇提物(0.25、0.50和1.00 mg/mL)作用Caski细胞24 h后,流式细胞术测定细胞周期DNA含量及亚G1凋亡峰,ELISA试剂盒检测Caski细胞中Caspase-9和Caspase-3活性及线粒体和胞浆中细胞色素C(Cyt C)含量,Real-timePCR测定P53、Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2/Bax比值,Western blot测定PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平(p-PI3K、p-Akt、p-mTOR),并计算p-PI3 K/PI3K、p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR比值.结果:南赤瓟醇提物对Caski细胞生长抑制作用呈明显的剂量依赖性;南赤瓟醇提物(0.25、0.50和1.00 mg/mL)能显著抑制Caski细胞增殖,并将其阻滞于G2/M期;可抑制p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白表达水平,降低p-PI3 K/PI3 K、p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR比值;上调P53和Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA及Bcl-2与Bax比值;降低线粒体中Cyt C含量,升高胞浆中Cyt C含量;增强Caspase-9和Caspase-3活性(P＜0.05,P＜0.01).结论:南赤瓟醇提物诱导Caski细胞凋亡的作用机制与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路磷酸化有关.
关键词： 南赤瓟 宫颈癌 CasKi细胞 PI3K/AKT/mTOR信号通路 -
南赤瓟提取物诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及作用机制研究
目的 观察南赤瓟提取物对宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用,并探讨其可能的作用机制.方法 用不同浓度的南赤瓟提取物(0.10、0.25、0.50、1.00、2.00 mg/ml)于不同作用时间(24、48、72 h)处理宫颈癌HeLa细胞后,采用MTT法检测不同浓度的南赤瓟提取物在不同作用时间下对HeLa细胞增殖率的影响；用0.50和1.00 mg/ml的南赤瓟提取物处理宫颈癌HeLa细胞48 h后Hoechst33258染色观察细胞形态变化,Annexin V-FITC/PI染色测定细胞凋亡率,JC-1染色法测定细胞线粒体跨膜电位水平,Caspase试剂盒检测HeLa细胞中Caspase-9和Caspase-3的活性,荧光定量PCR测定Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值.结果 南赤瓟提取物对HeLa细胞的生长抑制作用呈明显的时间-剂量依赖性；南赤瓟提取物(0.50和1.00 mg/ml)处理能显著降低HeLa细胞线粒体膜电位,促进HeLa细胞凋亡(P＜0.05,P＜0.01)；上调Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2与Bax的比值以及增强Caspase-9和Caspase-3的活性(P＜0.05,P＜0.01).结论 南赤瓟提取物可诱导HeLa细胞凋亡,其作用机制与降低HeLa细胞线粒体膜电位及调节凋亡相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-9、Caspase-3的表达有关.
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南赤瓟对宫颈癌HeLa细胞的作用
目的:观察南赤瓟醇提物对宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡作用的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:以0.05～1.00 mg/ml南赤瓟醇提物分别处理人宫颈癌HeLa细胞24、48、72 h后,以四甲基偶氮唑蓝比色法测定南赤瓟醇提物对HeLa细胞的生长抑制作用,并在倒置相差显微镜下进行一般形态学观察;用0.20和0.50mg/ml的南赤瓟提物处理HeLa细胞48h后,Annexin Ⅴ-FTTC/PI染色测定细胞凋亡率,Hoechst33258染色观察细胞形态变化,荧光定量PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-9、Caspase-3 mRNA的表达.结果:不同浓度(0.05～1.00 mg/ml)的南赤瓟醇提物具有抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、促进细胞凋亡的作用,呈明显的时间-剂量依赖性;南赤瓟醇提物(0.20和0.5mg/ml)处理能显著抑制HeLa细胞增殖,促进其凋亡(P＜0.01);上调Bax,Caspase-9和Caspase-3 mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2与Bax的比值(P＜0.05或P＜0.01).结论:南赤瓟醇提物可抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与上调Bax、Caspase-9、Caspase-3和下调Bcl-2凋亡相关基因表达有关.
