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Apr-3文献资料
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细胞凋亡相关新基因Apr-3转录剪接体的克隆、测序及亚细胞定位
目的克隆Apr-3基因的一个转录剪接体,并对其进行测序及亚细胞定位.方法培养HL-60细胞,提取HL-60细胞总RNA,应用RT-PCR获取Apr-3的转录剪接体的编码区cDNA序列,将该cDNA与质粒pcDNA3.1/myc-His(-)B连接,构建克隆载体,将其转化E.coli DH5α,进行测序,与GenBank中登录序列比对结果正确后将该cDNA与质粒pEGFP-C3连接,并将其转染COS-7细胞.结果对测序结果进行序列分析, 与GenBank中登录的Apr-3编码区完全一致.pEGFP -Apr-3基因表达产物定位于COS-7细胞的细胞膜和细胞质.结论对Apr-3基因的一个转录剪接体进行克隆,构建了真核表达载体,首次发现Apr-3的该转录剪接体主要在真核细胞的细胞膜和细胞质表达,为后期对该基因的结构和功能的研究奠定基础.
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细胞凋亡相关新基因Apr-3的一个转录剪接体的克隆、初步表达及纯化
目的:克隆Apr-3基因的一个转录剪接体,进行原核表达,并进行初步纯化.方法:培养HL-60细胞,提取HL-60细胞总RNA,应用RT-PCR获取Apr-3编码区cDNA序列的前366bp,将该cDNA与质粒pcDNA3.0连接,构建克隆载体,将其转化E.coli DH5α,进行测序,与GenBank中登录序列比对,结果正确后将该cDNA与质粒pET28a连接,构建原核表达载体,转化大肠杆菌,诱导表达获得Apr-3蛋白.结果:对测序结果进行序列分析,与GenBank中登录的Apr-3编码区完全一致.Apr-3融合蛋白主要以包涵体形式存在.结论:成功构建了Apr-3的原核表达载体,获得了较纯的Apr-3融合蛋白.
